纯化水微生物限度检查法验证

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1、目录A、验证方案1•概述2.适用范围3.验证目的4.验证小组及职责分工4.1验证小组4.2职责分工5.验证内容6.漏项与偏差及采取的纠偏措施.7.验证结论8.验证方案批准B、验证报告1.概述2.适用范围3.验证目的4•验证小组及职责分丁4.1验证小组4.2职责分工5.确证内容6.漏项与偏差及采取的纠偏措施.7.验证结论8.最终批准9.再验证周期与年度回顾性验证1概述山于某些供试品抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性、重现性进行验证。验

2、证时,按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。2适用范围纯化水微生物限度检查一一薄膜过滤法的验证。3验证目的验证纯化水微生物限度检查——薄膜过滤法符合《中国药典》2005年版二部的规定要求。4验证小组及职责分工成员职责组长负责验证期间各部门的协调及整个验证过程的具体实施中心化验室负责验证方案的起草及具体实施，确保验证过程能按方案规定的程序进行，对各种验证资料(验证结果)应及时交与GMP组相关人员整理；负责验证方案的编写规范；负责各种验证资料(检查结果)的收集整理。质量保

3、证部负责验证方案的审核及批准；负责出具检验报告；并対微生物限度检查环境进行检测；负责验证文件的管理。5验证内容5.1品种：纯化水5.2验证方法：《中国药典》2005年版二部微生物限度检查——薄膜过滤法5.3计数方法的验证5.3.1验证试验用菌种验证试验用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的牛物学特性。大肠埃希菌(Escherichiacoli)(CMCC(B)44102)金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CMCC(B)2

4、6003)枯草芽砲杆菌(Bacillussubtilis)(CMCC(B)63501)白色念珠菌(Candidaalbicans)(CMCC(F)98001)黑曲霉(Aspergillusniger)(CMCC(F)98003)5.3.2菌液制备取经32.5°C培养18〜24小时的人肠埃希菌、金黄色匍萄球菌与枯草芽孑包杆菌营养肉汤液体培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液。取经25.5°C培养24〜48小时的白色念珠菌改良马丁培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为5

5、0〜lOOcfu的菌悬液。取经25.5°C培养5〜7天的黑曲霉改良马丁斜而培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液3〜5ml,将沦子洗脱°然后，吸出抱子悬液至无菌试管内，用9ml0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含50〜lOOcfu的抱子悬液。5.3.3供试液制备取纯化水lml,加pH值7.0无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液至100ml,混匀，分别人工污染上述5种代表试验菌株。5.3.4回收率测定⑴试验组取纯化水lml,加PH值7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液至100ml,混匀，过滤。过滤完毕后加入50〜lOOcfu试验菌，过滤，按薄

6、膜过滤法测定其菌数。(2)菌液组测定所加的试验菌数。(3)供试液对照组取规定量供试液,按菌落计数法测定供试品木底菌数。⑷稀释剂对照组川相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每lml供试液含50〜lOOcfu,按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。5.3.5试验结果试验组菌落计数(cfu/ml)实验次数大肠埃希菌金黄色裔萄球菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌黑曲霉123平均菌落数菌液组菌落计数(cfu/ml)实验次数大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽砲杆菌白色念珠菌黑曲霉123平均菌落数供试品对照组菌落计数(c

7、fu/ml)实验次数大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌口色念珠菌黑曲霉3平均菌落数稀释剂对照组菌落计数(cfu/ml)实验次数人肠埃希菌金黄色匍萄球菌枯草芽砲杆菌白色念珠菌黑曲霉平均菌落数试验组的冋收率(%)=试验组平均菌落数一供试液对照组平均菌落数菌液组平均菌落数X100%稀释剂对照组平均菌落数稀释剂对照组的冋收率(%)=—菌液组平均菌落数—xl00%试验组的回收率（％）实验次数大肠埃希菌金黄色衙萄球菌枯草芽砲杆菌白色念珠菌黑曲霉3平均回收率稀释剂对照组的回收率（％）实验次数人肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽砲杆菌白色

8、念珠菌黑曲霉平均冋收率5.3.6合格标准计算供试晶组的菌回收率、稀禅剂对照组的菌回收率。A、在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%。B、若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的白分率）均不低于70%,