SOP(作业指导书)

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1、上犹县人民医院Ganzhoushi-shangyouxianrenminyiyuan作业指导书HIV（ELISA法）抗体检测细贝!J上犹县人民医院检验科HIV抗体检测初筛实验室文件修订页HIV（ELISA法）抗体检测细则1.目的根据《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版），对艾滋病病毒抗体检测作必要的细化和补充，以规范本实验室对艾滋病病毒抗体的检测方法。2.适用范围本检测细则适用于对人体血液屮艾滋病病毒抗体检测。3.职责3.1检测人员：负责按照木检测细则对被检样品进行检测；3.2复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核；3.3科室负责人：负责对科室综合管理和

2、检测报告的签发。4.检测依据GB16000-1995艾滋病诊断标准及处理原则。5.方法原理在微孔板上预包被高纯度基因重组HIV（H2）型抗原，可与样品中抗HIV抗体反应，同时加入HRP标记HIV（l+2）型抗原，然后用TMB底物作用显色，加入终止液终止反应，有颜色变化的微孔板变为黄色，颜色的深浅与血清+IIIV抗体含量呈正比，通过酶标仪检测吸光度（0D值）从而判定样品中HIV抗体的存在与否。3.检测仪器设备名称、型号和材料6.1美国宝特ELX800型酶标仪；37°C1°C6.2水浴箱土；6.3（新鲜的）蒸憎水或去离子水；6・4容量器（用于准备洗涤液）；6.5一次性隔离衣、手套、帽

3、子、鞋套。6.6计时器；6.784消毒液、75%乙醇;6.8适用于盛装有可能受污染的物品的容器；6.9吸水纸；6.10微板振荡器（用于溶解及混匀结合物与样品，速度约为900r/min）；第1页共7页6.11KHBST-36W洗板机；6.12加样器（20〜100uL），准确度±2%及一次性加样头。4.检测环境条件25°C所有的实验应20°C〜室温中进行&检测步骤5.1检测前准备&1.1样品收集和准备a.不需要特殊准备，不需要病人禁食；b・血清和血浆都可使用，柠檬酸，肝素和EDTA等抗凝剂不会产生影响，但不能与其他药物并用；c・血液应以一般法收集，并要小心处理；d.自血清中去除纤维蛋

4、白，自血浆中去除红血球，避免溶血；e・标本中若含氮化钠或微粒物质会产生错误结果；f.高胆红素血、高溶血、乳糜血或高蛋口血标本通常会影响实验结果；2°C8°C-20oCg.标本中应无微生物，在〜温度下，可保存一周，新鲜血液标本可长期保存在，标本要避免反复冻融；56°Ch.经一个冷冻/融化周期处理或在30分钟的热灭活标木不会影响实验结果;i.标本上应有与其它标本分开产，并有明显标记（如H1V检测、姓名、编号或时间）。8.1.2检测试剂：本实验室采用珠海丽珠和英科新创两种人类免疫缺陷病毒IIIV（l+2）型艾滋病病毒抗体酶联免疫检测试剂（双抗原夹心法）珠海丽珠英科新创a.微量酶标板12

5、X8孔；微量酶标板12X8孔b.1瓶IIIV阳性对照（lml）,1瓶I1IV阳性对照（lml）c.1瓶HTV阴性对照（lml）；1瓶HIV阴性对照（lml）d.1瓶（50mL/瓶）浓缩洗涤液（20X）；2瓶（25mL/瓶）浓缩洗涤液（20X）e・显色剂A、B液（7n±各1瓶；显色剂A、B液（7n±各1瓶；f.1瓶HIV终止液（7讥/瓶）；1瓶HIV终止液（7讥/瓶）g・1个自封袋；1个自封袋h.2张封板膜。2张封板膜&2检测步骤&2.1第2页共7页将标本、试剂和需要数量的微孔放置室温平衡（约15至30分钟）；&2.2配液：将浓缩洗涤液（25X）用蒸憾水或去离子水稀释至使用量备用；

6、&2.3编号：将样品对应微孔按序编号，每板设空白孔1孑L、阴性对照3孑L、阳性对照2孔；8.2.4加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50uL、空白孔不加任何物；37°C&2・5温育:用封板膜封板后置温育30分钟；&2.6洗涤：小心将封板膜揭掉，至洗板机上洗涤6遍；&2.7加酶：除空白孔外，其余孔加酶标记物50ul（英科新创试剂则加1OOul）37°C8.2.8温育:用封板膜封板后置温育30分钟；8.2.9洗涤：小心将封板膜揭掉，至洗板机上洗涤6遍8.2.8显色：每孔加入显色剂A、B液各50uL,轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置37°C避光显色30分钟；（英科新创试剂则2

7、0分钟）；&2.9测定：每孔加终止液5011L,轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长检测，参比波长630nm）,使用广州华鑫HSELxSOx酶联免疫检验分析系统操纵美国宝特ELX800酶标仪测定各孔0D值，和计算CUTOFF值。&3操作注意事项&3.1待检标木和试剂盒（含有人血成分）及废弄物有潜在传染性，应严格遵守消毒隔离制度；&3.2不要用嘴吸吸管；&3.3实验操作后应立即去除手套，用清洁液洗手；&3.4避免标木溅出，污染环境；&3.5避免皮肤粘膜接触FLS