高效液相色谱一质谱联用法测定人体血液中脂肪酸含量

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1、14化学分析计量2011年，第2O卷，第5期高效液相色谱一质谱联用法测定人体血液中脂肪酸含量木许倩盛灵慧李保山黄峥(1．北京化工大学化工资源有效利用国家重点实验室，北京100029；2．中国计量科学研究院，北京100013)摘要建立了一种用液相色谱一串联质谱(HPLC—MS)快速、准确地对人体血液中游离脂肪酸进行分离和定量的方法。该法使用Dole提取法，提取的样品直接进行分析，无需衍生化处理。该方法以氘代十六烷酸为内标物，采用液相色谱一质谱联用法测定了人血清中游离脂肪酸的含量，各脂肪酸线性方程的相关系数均大于0．99，方法的回收率为90．02

2、％～100．05％，测定结果的相对标准偏差小于9％(=9)。关键词血清游离脂肪酸液相色谱一串联质谱根据单双键组成脂肪酸可分为饱和脂肪酸、单甲醇：分析纯，美国J．T．Baker公司；不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸3种。流行病学研磷酸：分析纯，北京化学试剂公司；究表明，脂肪酸与胰岛素抵抗、冠状动脉疾病、高血实验所用其它试剂均为分析纯；压、肥胖等慢性病以及乳腺癌、结肠癌等疾病的发生实验用水为millipore超纯水。具有一定的关联性。人体血清中总脂肪酸的组成及1．2样品处理其水平是人体摄入脂肪酸和代谢后的重要指标，进取1mL血清于15mL离心管中，加

3、入50L同行人体血液中的脂肪酸组分分析有助于健康状况评位素十六烷酸内标溶液(10mg／L)，加入5mL混合价'。目前脂肪酸的测定通常采用衍生的方法对液(异丙醇一正己烷一2mol／L磷酸，体积比40：10：脂肪酸进行甲酯化反应后通过气相色谱或气相色谱1)，室温反应10min，随后加入2mL正己烷和3mI一质谱法分析，但衍生化的过程不仅花费大量水，涡旋混匀，以4500r／min离心5min，提取全部的时间，而且会对样品造成损失。因此笔者建立了上清溶液，氮气吹干。加入1mL甲醇溶液复溶，进一种快速、准确的定量方法，此方法使用Dole提取行HPLC—

4、MS分析。法j，提取的样品直接进行分析，无需衍生化，用1．3标准曲线配制HPLC—MS分离、定量了人血液中游离脂肪酸，并采将18种脂肪酸分为饱和脂肪酸和不饱和脂肪用氘代十六烷酸为内标物测定了回收率。酸两类，准确称量后配制了两组混合标溶液作为母1实验部分液，溶液中每种脂肪酸浓度为200g／mL。从母液1．1主要仪器与试剂中吸取适量用甲醇稀释成0．2～100~g／mL的标准液相色谱串联质谱联用系统(LC—MS—MS)：工作液，存放在4℃冰箱中备用。包括高效液相色谱仪(Agilent1200型，美国Agilent1．4仪器工作条件公司)和串联三重四

5、极杆质谱仪(Agilent6410型，(1)色谱条件美国Agilent公司)；色谱柱：XTerraC8(2．1mm×150mlYl，3．5m)，电子分析天平：XP65型，d=0．01mg，梅特勒一美国Waters公司；流动相A为水(含5mmol／L乙酸托利多仪器(上海)有限公司；铵)，B为乙腈(含5mmol／L乙酸铵)，流速为0．17种脂肪酸(十三烷酸、十四烷酸、十七烷酸、油mL／min，流动相比例见表1。酸、硬脂酸、二十烷酸和二十二烷酸)标准物质：中(2)质谱条件国计量科学研究院生物实验室制备；使用电喷雾电离源(ESI)负离子模式和多反应1

6、1种脂肪酸(十二烷酸、十六烷酸、十六碳一稀监测(MRM)模式分析；喷雾气(Gas1)、雾化辅助加酸、亚油酸、十八碳三稀酸、花生酸、二十碳一稀酸、热气(Gas2)、气帘气(CUR)和碰撞气(CAD)均为氮二十碳二稀酸、花生四稀酸、二十碳五稀酸、二十二气；裂解电压：130V；干燥气温度：350~C；脱溶剂气碳六稀酸)标准物质：购自美国Sigma—Aldrich公司：中国计量科学研究院基本科研业务费项目(AKY1002／I102)血清样品：解放军医学科学研究院；收稿日期：2011—07—19许倩，等：高效液相色谱一质谱联用法测定人体血液中脂肪酸含量

7、15表1流动相配比合液提取样品。时间／rain流动相A／％流动相B／％2．4色谱柱的选择0406O试验比较了XTerraC色谱柱(2．1mmX1501O2080152O80mm，3．5Ixm)，XTerraC】8色谱柱(2．1mmX1502O1O9Omm，3．5m)和BEHC】8色谱柱(2．1mmX50nlm，2520801．7m)在相同的梯度条件下，对标准溶液18种脂354060454060肪酸的分离效果。结果表明，XTerraC色谱柱对18种脂肪酸的分离效果最好，见图1。因此选用XTer．流速：9．0L／rain；毛细管电压：3．8kV。

8、raC色谱柱进行样品分析。BEHC。色谱柱是UP．2结果与讨论LC分离中的通用型色谱柱，但对于脂肪酸这种非水2．1仪器条件的建立溶性的弱极性化合物，分离度较差；XT