《动物寄生虫病学》许金俊-常见食源性寄生虫病的检验与处理

《《动物寄生虫病学》许金俊-常见食源性寄生虫病的检验与处理》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、常见食源性寄生虫病的检验与处理一、通过肉品传递给人的绦虫呦病（一）猪肉囊尾坳（猪囊虫）猪囊虫是一种重要的肉源性的人畜共患寄生虫，严重危害人类健康，冇猪囊虫寄生的猪肉不能出口，即使内销，也必须经严格处理才能出厂，冇的共至不能食用，造成极大经济损失，所以猪囊虫的检验是肉品卫生检疫的重要项目之一。检验1、生前检验1.1基本情况调查猪的饲养周期，饲养方式（是否采用散养），是否來口疫区。1.2静态检査猪是否肩胛部壇宽，后臀部隆起，身体呈哑铃状或狮子形。1.3动态检査猪是否走路前肢假硬，后肢不灵活，左右摇摆；发音嘶哑，呼吸困难；外界给予的触摸等刺激表现恐1.4活体舌检将猪只进行相应保定，然后用开口器将

2、猪口撬开，拉出舌头，检视和用手触摸舌回、舌下、舌两侧及根部，发现冇米粒至黄豆大小的凸起或感到冇大小不等的疙瘩时应怀疑为囊虫，此时划破黏膜见到囊虫即可确定。5免疫学方法包括皮内试验、间接血凝试验、乳胶凝集试验、碳索凝集试验、补体结合试验、免疫扩散、对流免疫电泳、间接荧光抗体试验、免疫酗染色试验、酶联免疫吸附试验（EL1SA）等。其中，EL1SA法具冇高敏感性和特异性，是猪囊尾蝴病生前诊断的常用方法，现己确定为我国猪囊尾蝴病诊断技术的标准方法，除炭末等凝集试验外，其他方法均需时太久无法在收购站推广使用，现将炭末凝结实验和EL1SA方法介绍如下:炭末凝结实验：取无其他疾病的囊虫病猪的囊液经56°

3、C30分钟灭活，每20讪放入一装冇玻璃珠的三角烧瓶内，家炭粉4克，充分混匀后，加入pII7.2的PBS液60ml混匀后置于37°C-40°C水浴中致敏一小时，致敏时连续振荡，致敏后移入沉淀管中，以2000转/分，离心10分钟，弃去上清液，向沉淀物中加入灭活兔血清4ml搅匀，以300^500转/分离心10分钟，弃去上清液，加入4倍抗原稀释液即成炭末抗原。最后加千分之一的叠氮钠存放在4°C冰箱中备用。若阳性血清稀释64倍达到“++”，标准阴性血清完全不凝集，蒸馄水也不凝集时此抗原效价合格。检测时取耳静脉血液6滴加入盛冇2毫升0.3%柠檬酸钠的试管中使血液完全溶解，取此液一滴于玻板侧圈中，加抗原

4、一滴混匀，一般1〜3分钟可观察判定完毕。判断标准为“一”炭末不凝集，液体不透明；“+”炭末微凝集，液体混沌；“++”炭末半数凝集，液体比较透明，“+++”炭末大部分凝集，液体透明；“廿”炭末完全凝集，液体完全透明。'‘++”以上判为阳性猪标准，“+”以下猪按阴性猪处理，此法符合率为73.8%。酶联免疫吸附试验（ELISA）：1材料准备1.1器材EL1SA反应板、酶联免疫检测仪、加样器、洗瓶、lOcmXlcm普通滤纸条等。1.2试剂猪囊尾恸层析抗原、葡萄球菌A蛋白（SPA）、辣根过氧化物酶（HRP）标记物（IIRP-SPA）、猪囊尾蝴标准阴性血清滤纸片和阳性血清滤纸片等。1.3被检猪全血滤纸

5、片的制作将lOcmXlcm普通滤纸条的一段标记被检猪号码，另一端吸取被检猪任何部位血液1〜2滴，于室内阴干后，置丁・4°C冰箱内（可保存6个月）。1.4溶液配制溶液配置的方法见附录。2操作方法1抗原包被2.1.1首先以抗原包被液（见附录小1）洗涤EIJSA反应板3次。2.1.2按使用说明书用抗原包被液稀释抗原至工作浓度。2.1.3用加样器加工作浓度抗原至ELISA反应板各孔内，每孔0.ImL,加盖后置丁室温过夜。2.2洗涤甩净ELISA反应板孔内的抗原包被液，每孔加满洗涤液（见附录＞

6、'2）,浸泡3min后，甩去洗涤液，并用滤纸吸去残留的洗涤液，驱除孔内气泡，巫新加入洗涤液。按同样方法洗涤

7、3次。2.3滤纸血片的处理将被检血滤纸片、标准阴性血清滤纸片及标准阳性血清滤纸片均剪成lcmXlcm大小，分別置于青霉素瓶内，每1cmXlcm滤纸片加入稀释液（见附录«

8、'2）0.3mL,浸泡20min,即滤纸片变白后即可。2.4加样2.4.1每份被检滤纸血片浸液加两孔，每孔0.1mL.2.4.2标准阴性、标准阳性对照孔内加入柑应滤纸血片浸液两孔，每孔0.1mL.2.4.3空白对照孔加稀释液两孔，每孔0.1ml“2.4.4加样后加盖，于室温下放置30min。5洗涤方法同5.2.2。2.6加酶标记SPA。.2.6.1按使用说明书以稀释液稀释IIRP-SPA标准物至工作浓度。2.6.2被检孔、

9、标准阴性孔、标准阳性孔、空白对照孔每孔加11RP-SPA标记物0.12.6.3加盖，于室温下放置30min。2.7洗涤方法同5.2.2。2.8加底物每孔加现配置的底物溶液（见附录中3）0.1mL,于室温放置10min。2.9终止反应每孔加终止液（见附录＞

10、'4）2滴，以终止反应。3判定在标准阳性孔呈深黄色，标准阴性孔呈无色或浅黄色，空白孔呈无色的前提F,判定检验结果。3.1目测判定与标准阴性孔柑比，颜色深于标准阴性孔者，