组织细胞培养考试

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1、单选，25分名解，5个，10分简答，论述，65分一、名解1.原代培养（primaryCulture)从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段。细胞群是异质的，细胞相互依赖性强。细胞独立生存性差。2.传代培养：当细胞增殖达到一定密度后，需要分离出一部分细胞和更新培养液，继续接种进行培养。这一过程称为传代。否则将影响细胞的继续生存。3.克隆形成率（CloningEfficiency)：细胞被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细胞小群（克隆）的百分数。4.细胞系（cellline)：初代培养细胞一经传代后，称做细胞系。5.无限细胞系：细胞获永久性增殖能

2、力。核型大多变成异倍体。6.克隆细胞株:从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群.7.细胞分裂指数（MitoticIndex,MI)：细胞群中每1000个细胞中的分裂相数.8.细胞相互接触能抑制细胞运动，这种现象称为接触抑制(contactinhibition)。9.饲细胞(Feedercells)：也称为滋养细胞，用成纤维细胞或其它细胞长成单层后，用大剂量射线照射，使细胞失去增殖能力，但能存活和有代谢活动。将其作为底物，其它细胞接种上面；饲细胞的代谢产物也有利于其它细胞生长。饲细胞用于：特殊难培养

3、细胞，注意避免用同源细胞。二、大题1血清的主要作用（1）提供细胞生存、生长和增殖所必需的生长调节因子。（2）补充培养液中没有或量不足的营养成分。（3）含有生长基质成分使细胞易贴附在培养器皿上。（4）提供载体蛋白，可结合维生素、脂质、金属离子等。（5）有中和毒性物质保护细胞不受伤害。（6）提供蛋白酶抑制剂，保护细胞不受死细胞释放的蛋白酶的损害。2如何提高体外培养细胞的成活率成功的关键:培养物必须贴附在底物上细胞生长和增殖（1）组织和细胞的供体年龄（2）培养条件：合理的培养基，血清，胰岛素（3）贴附底物(4)培养方法：酶消化分离，注意浓度以及消化时

4、间3培养用液有哪些？（1）平衡盐溶液（2）天然培养基（3）合成培养基（4）消化液（5）pH调整液：NaHCO3溶液、HEPES（分子量238.31）溶液(6)抗生素溶液4以心肌细胞（神经元）为例，描述培养细胞的整个过程？（一）取材（二）组织的分离1、将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。2、用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。3、用手术剪将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s

5、液洗三次，转移至小青霉素瓶中。4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离5、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。6、静置5—10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。7、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。8、加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。9、加入培养液l—2ml（视细胞量），血球计数板计数。10、将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。大鼠大脑皮层神经组织细胞培

6、养组织来源新生大鼠1-2日龄，碘酒，洒精消毒。取出大脑，分离脑膜，夹取两侧大脑皮质放入接种培养液中，用D-Hank’s冲洗二遍。剪碎，0.5-1mm3,用D-Hank’s充分洗去残血加入5-10倍量0.25%胰蛋白酶，移入离心管中放到水37℃浴箱中消化20-25分钟。终止消化离心洗涤1000转/分，5分钟弃上清。吹打制成细胞悬液。台盼兰染色计数后接种于事先涂好多聚赖氨酸培养板中。37℃5%CO2培养2天后换生长培养液5细胞冻存过程？冷冻过程要缓慢。需要冷冻保存的细胞先在4℃冰箱中放置30－60分钟；然后转入-20℃，放置30分钟；然后再转入-8

7、0℃放置16－18小时（或过夜）；最后放入液氮中长期保存。62-巯基乙醇的作用在杂交瘤技术中，常在DMEM培养基中加入2-巯基乙醇（2-Me).2-Me对细胞的生长有非常重要的作用，（1）能诱导细胞增殖；（2）避免过氧化物对培养细胞的损害；7胰蛋白酶溶液特点？胰酶的主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞相互离散。胰酶对细胞的分离作用与细胞的种类和细胞的特性有密切关系。一般来讲，胰酶浓度大、作用温度高、作用时间长，对细胞分离能力也大，但超过一定的限度会损伤细胞。胰酶溶液在pH8.0，温度为37℃时，作用能力最强（但是是在ph7.2时使用，无Ca2

8、+、Mg2+用）。注意：钙离子、镁离子和血清蛋白的存在会降低胰酶活力。因此，胰酶溶液常用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks’平衡盐溶液配制成0.25