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时间:2019-11-27
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1、无创性产前诊断探究进展【摘要】妊娠孕妇外周血中或宫颈管内存在有胎儿细胞或遗传物质,利于各种方法富集它们并进行遗传分析,检测胎儿遗传病及染色体病,可达到无创性产前诊断的目的。【关键词】孕妇外周血;富集;胎儿细胞;无创性产前诊断产前诊断是预防单基因疾病、染色体疾病主要的措施。然而目前的产前诊断方法主要利用侵入性方法获取绒毛细胞、羊水细胞、脐带血细胞标本进行疾病检测,这些有创性手术存在导致仁5%左右胎儿流产的风险。为解决这一难题,人们一直在寻求一种方法能够从母体中获取胎儿细胞或遗传物质进行遗产病的检查,实现无创性产前诊断。经过多年的研究,无创性产前诊断技术已经得到长足发展
2、,并逐渐转向临床应用阶段,本文将主要阐述无创性产前诊断技术的发展过程,临床应用及未来展望。1母体中胎儿细胞或遗传物质通过依据细胞的特性富集胎儿细胞或胎儿遗传物质,其中如胎儿的滋养细胞、淋巴细胞、有核红细胞、母体血浆中胎儿DNA或RNA等,都可以作为进行无创性产前诊断研究的对象。1.1滋养细胞:滋养层细胞主要分布在子宫血管组织和子宫腔内,于叶状绒毛膜转变成平滑绒毛膜过程中脱落和降解到达孕妇宫颈管,1995年Rodeck等在经子宫颈细胞(transcervicalcellTCC)的灌洗样本中检测出滋养层细胞成分,并且证实通过不同的方法约50%〜70%经子宫颈可富集到胎儿
3、细胞[1]。收集TCC细胞样本窗口期跨越孕7-13周。但因其多核特点及其与胎盘的嵌合现象,有致误诊可能。1.2淋巴细胞自从walknownska首先发现了怀有男胎的孕妇外周血中含有胎儿淋巴细胞以来,人们通过主要组织相容性抗原分离鉴定胎儿淋巴细胞进行产前诊断[2]。但这类细胞存在一些不可避免的技术难题,由于在早孕期还没产生大量胎儿淋巴细胞,此时母血中的胎儿淋巴细胞的数目极少,因此,不能进行早期的产前诊断,限制了其临床上的应用。另外,胎儿淋巴细胞可长期存在于母体外周血,DianaW在母体外周血中发现了存在27年的胎儿淋巴细胞[3],因此影响了检测的准确率,限制了胎儿淋巴
4、细胞在无创性产前诊断的应用。1.3有核红细胞胎儿有核红细胞(fetalnucleatedredbloodcells)十分适合于无创伤性产前诊断。在妊娠早期时胎儿有核红细胞的含量相对较高,在非妊娠成人中很少出现,其在血液中的生存期约为90天,因此孕妇外周血不会存在上次妊娠时遗留的胎儿有核红细胞。此外胎儿有核红细胞能够通过形态学进行分离。另外胎儿有核红细胞表达的转铁蛋白(CD71、血型糖蛋白A潜在的胎儿特异性抗原(如HAE9抗原)对于富集和分离胎儿有核红细胞都是有用的生化标志[4]o1.4母体血浆游离胎儿核酸物质1997年Lo等报道了在母体外周血中存在游离的胎儿脱氧核糖
5、核酸(cell-freefetalDNAcffDNA),cffDNA来源于胎盘,可能由于滋养层细胞凋亡后其核酸物质释放到母体,孕妇怀孕4周后就能够被检测出,其半衰期很短,一旦释放入外周血7-11小时就被母体清除,这些特征使其很有潜力成为无创伤性产前诊断的胎儿物质[5]。然而在母体血中绝大多数游离DNA来自于母亲,游离的胎儿DNA仅占到3%-6%,在对cffDNA分离和鉴定提出了很高的要求,另外,母体血中胎儿mRNA是现在无创伤性产前诊断的又一研究热点。和游离的胎儿DNA一样,母体血中胎儿mRNA也主要来源于胎盘组织,胎儿mRNA已被用作研究、监测胎盘病理性妊娠的指标
6、。有研究表明孕妇血浆中CRHmRNA浓度越高其发生子痫的风险越大[6]。2无创性产前诊断技术的应用母体外周血中存在的胎儿细胞或核酸物质极其微量,又容易受母体血的干扰。因此对其分离和鉴定的要求也相当高,传统的产前诊断技术不能用于无创性产前诊断领域中。2.1胎儿有核红细胞富集术有研究报道1ml母血仅含有—个胎儿有核红细胞,通常可采用以下几种方法进行富集:(1)利用胎儿有核红细胞的密度特征进行密度梯度离心;(2课用流式细胞仪富集表达CD71的胎儿有核红细胞(3)利用胎儿有核红细胞的核圆度、核形态、血红蛋白丫链染色强度和染色胞浆亮度等形态参数进行分离和富集[7]。用已分离和
7、富集的胎儿细胞进行产前诊断的方法主要有PCR及FISH,可对遗传病、染色体病进行产前诊断。2.2基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)MALDI-TOF-MS能够高度准确的测定物质的质荷比,其分辨率是基因分析仪的100倍[8]。MALDI-TOF-MS与多种技术结合能够特异、灵敏的检测单个分子水平的DNAo2007年Lo等选择PLCA4编码区域的一个SNP位点,运用MALDI・TOF・MS、PCR、和碱基延伸等技术。根据染色体杂合子SNP其等位基因含量的比率不同,成功的对怀有21-三体胎儿的孕妇进行了无创伤性产前诊断,该法的灵敏度为90%、
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