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1、实用中央民族大学生命与环境科学学院生物化学实验综合性设计实验报告牛血中SOD分离纯化及含量、活性、相对分子质量的测定Theseparation,collection,purificationandidentificationofSODfromthecowblood姓名：唐胜华学号：0941063年级：09生科专业：生物科学文档实用小组成员：韩旭思关晴月指导教师：刘立亚2011年12月17日牛血中SOD分离纯化及含量、活性、相对分子质量的测定唐胜华韩旭思关晴月（中央民族大学北京市100081）摘要：目的熟练掌握从动物血液中提取SO
2、D及分离鉴定和活力测定。方法破碎细胞释放其中的内涵物，有机溶剂去除血红蛋白，再用透析法纯化所得SOD，然后根据SOD的物理化学性质进行各项指标测定。结果实验中SOD在限制邻苯三酚自氧化的用量时随着提取纯化次数的增加而增加，PAGE电泳胶块染色和脱色后可以明显的发现胶块正中央有透明区域。结论动物血液中含有ＳＯＤ，它具有抑制氧化作用的功能。关键词：SOD，邻苯三酚自氧化，ＰＡＧＥ电泳，抑制氧化。 The separation, collection,purificationandidentificationofSODfromthec
3、owblood TANGSheng-hua，HANXu-si,GUANQing-yue(MinZuUniversityofChina,CityofBeijing,100081)Abstract:ObjectiveFromtheexperiment,wecanknowexactlyhowtogetSODfromcowblood,thenseparate,collect,purifyandidentifyit.MethodswestartondeterminingthefeatureofSODafterextract
4、ing,separating,andcollectingit,thenwe文档实用willgetwhatwewantfromtheexperiment.Resultsthroughtheexperiment,obviouslythattheamountofPyrogallolusedtosuppresstheOxidationrateisincreasedwiththestepstoseparate,collect,purifytheSODincreasing.AlsowecanfindthatthereisaTranspare
5、ncyinthemiddleoftheRubberblockaftertheElectrophoresisfinished.ConclusionsThroughtheexperiment,wedeeplyknowthatthereisalwayssomeSODintheanimalbloodwhichitselfcansuppresstheOxidationrateinthebody.Keywords:SOD,self-OxidationofPyrogallol,PAGEElectrophoresis,Oxidation-sup
6、ression前言近年来，随着生物科学领域中分子生物学的迅速发展，使得之前只能从细胞层面研究血液组成及功能的瓶颈得以突破，进入研究血红细胞中分子组成的层次。由此，在大量实验中都存在着这么一种现象，红细胞中有某种组成成分能够抑制生物自氧化的速率，延缓细胞衰老和凋亡的时间。通过大量的实验证明，这种物质就是超氧化物歧化酶（又称SOD），是一种能专一地清除超氧阴离子自由基(O—2)的金属酶。按所含金属离子不同可分为Cu—Zn—SOD、Mn—SOD和Fe—SOD。SOD催化反应：2H++2O—2→2H2O2+O2。SOD对过量的O—2的及
7、时清除保证了机体内O—2的含量相对平衡，对机体起防护作用。国内外研究表明SOD具有抗炎、抗衰老抗辐射等重要作用。我国近年来在植物SOD的研究领域有大量相关进展报道。许平、袁艺、赵文芝、余旭亚等分别从大蒜、桑叶、沙棘、仙人掌中提取出SOD并进行相关研究。其提取方法因原材料的不同而不同，本实验通过对牛血红细胞中SOD的研究，证明SOD的生理作用以及影响其活性的因素，从而从更深层面上认知SOD的生理生化作用。1.材料和方法1.1实验材料与试剂文档实用新鲜牛血液（含有柠檬酸钠抗凝剂）1.1.1实验试剂0.6%的TritonX-100溶液
8、，0.9%的生理盐水，4℃下预冷的95%乙醇，4℃下预冷的氯仿，丙酮，蒸馏水，2.5mmol/LpH7.6磷酸钾缓冲液，0.05mol/L邻苯三酚，10mmol/L的HCl溶液，考马斯亮蓝R-250试剂，100mg/mL的标准蛋白溶液。1.1.2电泳试剂PAGE
