高效液相色谱测量发酵液中灵菌红素含量开题报告

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1、开题报告高效液相色谱测量发酵液中灵菌红素含量一、选题的背景、意义灵菌红素(prodigiosins)是一类天然红色素，具有吡咯环结构，主要包括prodigiosin、nonylprodigiosin、cylononylprodiginine和metacycloprodigiosin等。灵菌红素均具有一定的免疫活性，如抑制真菌、细菌和霉菌等功效，且具有一定的抗肿瘤作用，因此具有很大的药用价值，受到科研工作者的极大关注[1,2]。同时，由于其天然红色素的特性，在作为食品添加剂时具有较高的安全性，无毒、色泽亮丽诱人

2、等优势，倍受人们的瞩目[1]。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。高效液相色谱法有“三高一广一快”的特点：①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效

3、果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在uL数量级。④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点灵菌红素对医学、食品方面有巨大的作业，但目前利用高效液相色谱法测量发酵液中

4、的灵菌红素的报道非常少，因此研究高效液相色谱法测量发酵液中的灵菌红素是一条非常有应用前景的测量方法。本实验通过测量发酵液中的灵菌红素来确定一条利用高效液相色谱法测量其含量的有效方法。一、相关研究的最新成果及动态2.1HPLC在医学中的应用[2]2.1.1HPLC测血药浓度临床上应用的一些药物由于其有效血药浓度范围狭窄，个体差异大，且不同厂家产品存在生物利用度差异，其血药浓度与药效和毒性密切相关，在治疗过程中需要常规监测其血药浓度。沈建幸等[3]建立以高效液相色谱法同时测定苯巴比妥、苯妥英、卡马西平血药浓度的方

5、法，方法为取患者血清经二氯甲烷提取后在C18柱上分析，流动相为甲醇一水(54：43)，柱温为30°C，检测波长为254nm，流速为0.8ml／min。结果表明此方法简便稳定，用于苯巴比妥、苯妥英、卡马西平的血药浓度监测效果良好。此外测定一些药物的血药浓度可研究该药在人体的药代动力学及药效学赵丽等[4]用HPLC法测定八血浆中的普鲁卡因，于仁娈等[5]用HPLC法测定盐酸二甲双胍的血药浓度，结果都表明该方法准确、简便、专属性强、灵敏度高，适用于临床药代动力学及药效学研究。2.1.2测定中药中的有效成分由于中药药

6、物成分复杂，所以需要建立有效、准确的方法测定中成药有效成分的含量，以控制产品质量。马开等[6]用HPLC测定痛可停胶囊中欧前胡索和异欧前胡索含量，结果显示该法测定的欧前削素和异欧前胡索分别在60~325μg和50~250μg范围内与峰面积呈线性关系，平均回收率分别为98.3％和98.7％，RSD分别为1.73％和1.65％，表明该法可作为痛可停胶囊的含量测定方法。曾海静等[7]为了有效控制复方葛根合剂质量，测定其有效成分葛根索含量，研究采用HPLC法测定其中葛根索含量，结果表明此方法操作简便，结果准确可靠，精

7、密度好，可用于复方葛根合剂中葛根索的含量测定。2.2高效液相色谱在食品分析中的应用[8]2.2.1蛋白质与氨基酸的分析[9][10]蛋白质是由几十到几千个氨基酸分子借助肽键和二硫键相互连接的多肽链，相对分子质量大，在溶液中的扩散系数小，粘度大，易发生变性，这使他们的色谱分离情况不理想，因此蛋白质的分离和分析问题至今仍是具有挑战性的课题。MarAm.Yust[11]等用反向高效液相色谱法检测饲料中的色氨酸。其加权回收率为98.6％～100％。与其他的分析色氨酸的方法相比，反向高效液相色谱法在检测时间上有所减少。

8、李东等以HyperilODS—C18色谱柱，2，4一二硝基氟苯为衍生化试剂，梯度洗脱。结果表明所测氨基酸组分的浓度在0．2mg/L～0l3mg/L范围内与峰面积之间具有良好的线性关系，回收率为90.4％～101.0％，检出限为0．12mg/L～1．225mg/L，测定结果的相对标准差为1.05％～5.93％。陈春晓等采用高效液相色谱仪带全自动衍生功能的的自动进样器进行在线衍生，经梯度分离，再利用二极