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《GBT18980-2003乳和乳粉中黄曲霉毒素M1的测定-免疫亲和层析净化高效液相色谱法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、ICS67.100.10X04GB/T18980-2003乳和乳粉中黄曲霉毒素M,的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法DeterminationofaflatoxinM1contentinmilkandmilkpowder-Cleanupbyimmunoaffinitychromatogaphyanddeterminationbyhigh-performanceliquidchromatigraphyandfluorometer(ISO14501:1998，IDT)2003-02-21发布2003-08-0
2、1实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布GB/T18980-2003前言本标准的免疫亲和层析净化一高效液相色谱法等同采用ISO14501;1998《乳和乳粉中黄曲霉毒素M免疫亲和层析净化高效液相色谱法》。本标准免疫亲和层析净化一荧光光度法快速测定乳和乳粉中黄曲霉毒素M,o本标准中的附录A为资料性附录本标准由北京市质量技术监督局提出。本标准由全国食品工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:北京市产品质量监督检验所、青岛出人境检验检疫局、国家标准物质研究中心。本标准主要起草人:王晶、张鹏、张艺兵、邵明武。本标准为
3、首次发布。GB/T18980-2003乳和乳粉中黄曲霉毒素M,的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法免疫亲和层析净化高效液相色谱法1.1范围本标准适用于乳、乳粉，以及低脂乳、脱脂乳、低脂乳粉和脱脂乳粉中黄曲霉毒素M,含量的测定。乳粉中的最低检测限是。.08pg/kg，乳中的最低检测限是。.008pg/l1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。1.2.1黄曲碑毒索M，含，at7atoxinM,content通过本标准所测定出的本物质的质量含量。注:黄曲霉毒素M、的含量以微克/升伽g/L)或微克/千克(fig
4、/kg)表示。1.3原理试样通过免疫亲和柱时，黄曲霉毒素M被提取。亲和柱内含有的黄曲霉毒素M、特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，当样品通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M,(抗原)键合，形成抗体一抗原复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M,，收集洗脱液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M,含量1.4试荆除非特别声明，所用试剂为分析纯;使用蒸馏水、去离子水或其他相当纯度的水。1.4.1免疫亲和柱:应该含有黄曲霉毒素M的抗体。亲和柱的最大容量不小于100ng黄曲霉
5、毒素M,(相当于50ml浓度为2pg/l的试样)，当标准溶液含有4ng黄曲霉毒素M,(相当于50mL浓度为80ng/l的试样)时回收率不低于80。应该定期检查亲和柱的柱效和回收率，对于每个批次的亲和柱至少检查一次(见1.4.1.1和1.4.1.2)1.4.1.1柱效检查用移液管(1.5.4)移取1.0m工_的黄曲霉毒素M,储备液(1.4.5.2)到20mL的锥形试管中(1.5.9)。用恒流的氮气(1.4.3)将液体慢慢吹干，然后用10ml.10%的乙睛(1.4.2.2)溶解残渣，用力摇荡。将该溶液加人到40mL的水中，
6、充分混匀，全部通过免疫亲和柱。按说明书要求使用免疫亲和柱。淋洗免疫亲和柱后，洗脱下黄曲霉毒素M,。将洗脱液进行适当稀释后，用高效液相色谱仪测定免疫亲和柱键合的黄曲霉毒素M,含量。计算黄曲霉毒素M,的回收率，将其结果与1.4.1中所要求的指标进行比较。1.4.1.2回收率检查用移液管(1.5们移取。.8ml。005pg/ml的黄曲霉毒素Ml标准工作液(1.4.5.3)到10mL的水中，充分混匀，全部通过免疫亲和柱。按说明书使用免疫亲和柱。淋洗免疫亲和柱，洗脱下黄曲霉毒素M:。将洗脱液进行适当稀释后，用高效液相色谱仪测定免
7、疫亲和柱键合的黄曲霉毒素M，含量。计GB/T18980-2003算黄曲霉毒素M，的回收率，将其结果与1.4.1中所要求的指标进行对比。1.4.2乙睛:色谱级1.4.2.125%乙睛一水溶液:将250mL的乙睛(1.4.2)与750ml的水混溶(使用前需要脱气)。1.4.2.210%乙睛一水溶液:将100mL的乙睛(1.4.2)与900mL的水混溶(使用前需要脱气)。1.4.3氮气。1.4.4三抓甲烷:加人。.5%^-1.0%质量比(与三抓甲烷质量比)的乙醇进行稳定。1.4.5黄曲霉毒素M:标准溶液1.4.5.1校准溶液
8、黄曲霉毒素M:三抓甲烷溶液标称浓度为10pg/mL。根据下面的方法，在最大吸收波段处测定溶液的吸光度，以确定黄曲霉毒素M,的实际浓度。用分光光度计(1.5.11)在340nm^-370nm处测定，扣除三抓甲烷的空白本底，读取标准溶液的吸光度值。在接近360nm最大吸收波段A、二处，测得吸光度值为A，根据式(1)计算出浓度值c,(P
