噬菌体效价及转导、血清学反应.ppt

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1、实验十一：噬菌体效价及转导、血清学反应一、实验目的学习噬菌体效价测定的方法了解转导原理、学习转导实验方法学习凝集反应和沉淀反应的实验方法了解血清学反应在实际中的应用二、实验仪器、材料菌种：E.coliK12F、E.coliK12S、噬菌体裂解液培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基、EMB培养基E.coli及其抗血清、人IgG及兔抗人IgG载玻片、1%琼脂糖、打孔器等三、基本概念噬菌体效价titer噬菌斑plaque转导transduction凝集反应alllutination沉淀反应precipitation抗原antigen抗体antibod

2、y四、实验内容及步骤噬菌体效价的测定受体菌（E.colik12S）活化噬菌体裂解液的制备：用每管4.5ml牛液将噬菌体裂解液稀释到10-6四、实验内容及步骤倒平板牛肉膏蛋白胨固体培养基EMB培养基将素琼脂先溶化，再保温于50℃。向每支素琼脂中接入0.5mlK12S，混匀，再分别取噬菌体裂解液0.5ml（10-4、10-5、10-6），加入到素琼脂中，摇匀后立刻倒在牛肉膏蛋白胨平板上。四、实验内容及步骤培养待平板凝固后于37℃，培养12~16hr；根据噬菌斑数量计算噬菌体效价。四、实验内容及步骤转导点滴法四、实验内容及步骤转导频率的测定Ph

3、age裂解液0.5mLK12S0.5mL37℃10minPhage0.5mL10倍稀释4.5mL肉汤10-110-210-310-4接种量0.1mLEMB培养基四、实验内容及步骤待平板凝固后于37℃，培养48~72hrF菌S菌裂解液四、实验内容及步骤凝集反应按图加抗原和抗体及对照，静置5～10min，先用肉眼观察，后用显微镜在低倍镜下观察。四、实验内容及步骤生理盐水抗体(1:2)E.Coli四、实验内容及步骤凝集反应鸡红细胞－抗血清鸡红细胞－生理盐水四、实验内容及步骤沉淀反应将琼脂糖凝胶融化后滴加到干净的载玻片上，凝固后按下图位置打孔并在

4、孔中滴加相应的抗原和抗体。四、实验内容及步骤中央为1：2，周围为各浓度。抗原抗体四、实验内容及步骤将载玻片放到一个培养皿中，并放入一个湿棉球；将培养皿置于37℃静置12～24hr；观察结果：阳性反应在抗原和抗体之间形成白色沉淀线。四、实验内容及步骤沉淀反应：人IgG—兔抗人IgG左：中心为抗原，右：中心为抗体