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时间:2020-01-19
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1、第一部分微生物的利用实验2分离以尿素为氮源的微生物浙科版选修11.使用专一的培养基(含有尿素)分离专一的细菌(有脲酶的细菌)。2.利用指示剂颜色的变化检知(脲酶)所催化的反应。1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)脲酶+CO2NH3+H2O一、基础知识要分离一种微生物,必须根据该微生物的特点,包括营养、生理、生长条件等;方法:⑴抑制大多数微生物生长;⑵造成有利于该菌生长的
2、环境。结果:培养一定时间后,该菌数量上升,再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。3、实验室中微生物的筛选原理:培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长发育繁殖,而受到抑制,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。4、培养基选择分解尿素的微生物的原理本实验中,酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中,其变色范围是pH6.4~8.2,在中性情况下呈黄色,碱性情况下呈红色,尿素NH3中性碱性酚红颜色:黄色红色细菌1、制备无菌的尿素固体培养基
3、和LB固体培养基尿素培养基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g琼脂糖0.5g酚红0.25g水15mlLB培养基蛋白胨0.25g酵母粉0.12gNaCl0.25g琼脂糖0.5g水25ml对照组实验组二、操作过程灭菌后再加尿素2、倒平板:需要倒2个LB培养基,6个尿素固体培养基LB(对照)尿素10-410-5每个稀释度1个LB对照平板3个尿素平板(平行重复组)3、制备一定浓度梯度的细菌悬液:1g土壤+99ml无菌水,振荡,为102稀释液,依次制备103、104、105的土壤稀释液。4、稀释涂布分离法分离
4、细菌取10-4和10-5各0.1ml菌悬液接种涂布分离涂布前后三角刮刀需要灼烧吗?5、培养观察(倒置,37度)平板倒置按浓度捆成一摞恒温37℃培养LB培养基上10-2、10-3、10-4、10-5稀释度土样涂布结果尿素培养基上10-2、10-3、10-4、10-5稀释度土样涂布结果
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