紫外-可见分光光度法.ppt

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1、第十三章紫外-可见分光光度法1第十三章紫外-可见分光光度法UV/VisSpectroscopy13.4提高测量灵敏度和准确度的方法13.2分光光度法基本原理13.1物质的吸收光谱13.3紫外－可见分光光度法2分析方法的分类按方法的原理：可分为化学分析和仪器分析。化学分析：凡主要利用化学原理进行分析的方法称为化学分析法；仪器分析：主要利用物理学原理进行分析的方法则称为仪器分析法。如：光谱分析法，色谱分析法，质谱分析（MS）法，电化学分析法，核磁共振（NMR）分析法等。光谱分析法：常用的有可见－紫外分光光度法（UV/Vis）、红外分光光度法（IR）、荧光光度法、原子吸收法和X射线原子荧

2、光法等。3UV/Vis主要用于药物制剂的含量测定。激光诱导荧光光谱的灵敏度已达10-22克，达到了检测单个分子的水平，可用于癌症的早期诊断。分光光度法（吸光光度法）：根据物质的吸收光谱和光的吸收定律，对物质进行定量、定性分析的一种仪器分析方法。或者说它是基于被测物质的分子对光具有选择吸收的特性而建立的分析方法。4分光光度法的特点：灵敏度高------10-5mol·L-1~10-6mol·L-1相对误差小------2%~5%应用广泛-----医药、卫生、环保、化工等领域。根据测定时所选用的光源紫外分光光度法可见分光光度法红外分光光度法5常量分析、半微量和微量分析613.1物质的吸

3、收光谱713.1物质的吸收光谱波长范围辐射类型光谱类型0.1~10nm10~200nm200~400nm400~760nm0.76~2.5μm2.5~50μm50~1000μm0.001~1m1~1000mX射线远紫外近紫外可见光近红外红外远红外微波无线电波X光电子能谱真空紫外光谱紫外-可见（吸收、发射）光谱及荧光光谱红外光谱微波波谱核磁共振光谱813.1物质的吸收光谱913.1物质的吸收光谱物质对光的选择性吸收光是以电磁波形式传播的光子流。电磁波能量大小与波长和频率有关。辐射是量子化的，即不连续地、一份一份地发射或吸收，每一份称一个光子。光子的能量与辐射频率成正比、与波长成反比：

4、E=hυ=hcυ=c光的波长光速光的频率=1013.1物质的吸收光谱能量E基态E0第一激发态E1第二激发态E2第三激发态E3吸收光谱发射光谱E=hυ当一束光照射到某物质或某溶液时，该物质的分子、原子或离子与光子作用，光子的能量发生转移，物质中的这些粒子就会发生能级跃迁，从较低能量状态（基态）跃迁到较高能量状态（激发态）：这一过程称为物质对光的吸收。1113.1物质的吸收光谱White:f(l)=constantMonochromaticlight:Red:650nmGreen:520nmBlue:450nm1213.1物质的吸收光谱1313.1物质的吸收光谱Reflectan

5、ceSpectrumSpectralPowerDistributionSpectralPowerDistributionIlluminantD65ElectromagneticWave(nm)1413.1物质的吸收光谱1513.1物质的吸收光谱UV/VisradiationandElectronicExcitationsThedifferenceinenergybetweenmolecularbonding,non-bondingandanti-bondingorbitalsrangesfrom125-650kJ/mole,correspondstoEMradiationinthe

6、ultraviolet(UV)region,100-350nm,andvisible(Vis)regions350-700nmofthespectrum.UsingIRweobservedvibrationaltransitionswithenergiesof8-40kJ/molatwavelengthsof2500-15,000nm物质的吸收光谱1613.1物质的吸收光谱Energys*psp*nsspnns*p*p*s*p*alkanes150nmcarbonyls170nmunsaturatedcmpds.180nmO,N,S,halogens190nmcarbonyls30

7、0nmconjugatedUnlikeIRorNMR,wheretheremaybeupwardsof5ormoreresolvablepeaksfromwhichtoelucidatestructuralinformation,UV/vistendstogivewide,overlappingbands.1713.1物质的吸收光谱absorptionspectrumExcitationofσ-electronsneedshighenergyradiationExci