可见-紫外分光光度法.ppt

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1、第13章可见－紫外分光光度法Vis-UVSpectrophotometryChapter11第一节物质的吸收光谱第二节分光光度法基本原理第三节可见分光光度法第四节提高测量灵敏度和准确度的方法1.掌握分光光度法基本原理—Lambert-Beer定律，能熟练运用Lambert-Beer公式进行有关计算。2.掌握吸光度、透光率、吸光系数、摩尔吸光系数的概念。3.熟悉标准曲线法及标准对照法。4.了解物质对光的选择性吸收及吸收光谱。5.了解分光光度计的基本构造；提高测量灵敏度和准确度的方法。本章教学要求分析方法的分类按方法的原理：可分为化学分析和仪器分析。化学分析：凡主

2、要利用化学原理进行分析的方法称为化学分析法；仪器分析：主要利用物理学原理进行分析的方法则称为仪器分析法。如：光谱分析法，色谱分析法，质谱分析（MS）法，电化学分析法，核磁共振（NMR）分析法等。光谱分析法：常用的有可见、紫外分光光度法（UV）、红外分光光度法（IR）、荧光光度法、原子吸收法和X射线原子荧光法等。UV主要用于药物制剂的含量测定。激光诱导荧光光谱的灵敏度已达10-22克，达到了检测单个分子的水平，可用于癌症的早期诊断。分光光度法（吸光光度法）：根据物质的吸收光谱和光的吸收定律，对物质进行定量、定性分析的一种仪器分析方法。或者说它是基于被测物质的分子

3、对光具有选择吸收的特性而建立的分析方法。分光光度法的特点：灵敏度高------10-5mol·L-1~10-6mol·L-1相对误差小------2%~5%应用广泛-----医药、卫生、环保、化工等领域。根据测定时所选用的光源紫外分光光度法可见分光光度法红外分光光度法第一节物质的吸收光谱一.物质对光的选择性吸收二.物质的吸收光谱υ=c光是以电磁波形式传播的光子流。电磁波能量大小与波长和频率有关。辐射是量子化的，即不连续地、一份一份地发射或吸收，每一份称一个光子。光子的能量与辐射频率成正比、与波长成反比：E=hυ=hc一、物质对光的选择性吸收单色光:单一波长

4、的光束复色光:含有多种波长的光束电磁波谱:以波长大小顺序排列的电磁波谱图波长10pm300pm200nm400nm800nm500mm1cm1m光谱射线X射线紫外光可见光红外光微波无线电波方法光谱法分光光度法光谱法核磁共振可见光380nm780nm能量E基态E0第一激发态E1第二激发态E2第三激发态E3吸收光谱发射光谱E=hυ当一束光照射到某物质或某溶液时，该物质的分子、原子或离子与光子作用，光子的能量发生转移，物质中的这些粒子就会发生能级跃迁，从较低能量状态（基态）跃迁到较高能量状态（激发态）：这一过程称为物质对光的吸收。由于分子、原子或离子的能级是量子

5、化的，不连续的，只有光子的能量(hυ)与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差(ΔE)相等时，才能被吸收。不同的物质，其内部结构不同，基态和激发态的能量差ΔE不同，选择吸收光子的能量也不同，即吸收的波长(频率)亦不同。亦即不同物质只能选择性地吸收某一波长的光。光的互补紫400红660橙600黄560绿530蓝绿500绿蓝450蓝420光的互补：若两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，那么就称这两种单色光为互补色的光。物质的颜色与光的关系完全吸收完全透过吸收黄色光光谱示意表观现象示意复合光溶液的颜色：是由于它选择性地吸收了一部分光，而呈现它的补色。例如

6、：三(邻二氮菲)合铁配合物溶液吸收了508nm处的光，而呈现紫红色。将某物质的溶液，用不同波长的单色光作入射光，测定这一溶液吸光度A。每种波长的单色光都有其相对应的吸光度。然后以A为纵坐标，波长为吸收光谱中与吸收峰相对应的波长称为最大吸收波长，maxmax=515A480520560nm二、物质的吸收光谱横坐标作图，所得曲线即为该溶液的吸收光谱。吸收光谱说明，一种物质对不同波长的光的吸收程度是不同的如P278图13-2，是三（邻二氮菲）合铁配合物的吸收光谱。表明一种物质的不同浓度的溶液，吸收光谱的形状基本相同，最大吸收波长也一样吸收光谱体现了物质的特性

7、：吸收曲线的形状和max是定性分析的基础溶液的浓度愈大吸光度愈大是定量分析的基础第二节分光光度法基本原理一.透光率和吸光度二.Lambert-Beer定律一、透光率和吸光度I0=Ia+It+Ir透射光的强度It与入射光的强度I0的比值称为透光率I0It实验中，被测溶液和参比溶液分别置于同样质地和厚度的比色皿中，反射光强度大小近似可相互抵消(以参比溶液校正)，则上式简化为I0=Ia+It透光率愈大，溶液对光的吸收愈少IrIa溶液对光的吸收除与溶液本性有关外，还与入射光波长、溶液浓度、液层厚度及温度等因素有关。透光率的负对数称为吸光度A(absorbance)吸

8、光度愈大，溶液对光的吸收愈多二、Lam