2019-2020学年高中生物 第一章 无菌操作技术实践 第一节 微生物的分离和培养 第2课时 微生物分离和培养的技术操作（以大肠杆菌为例）学案 苏教版选修1.doc

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1、第2课时　微生物分离和培养的技术操作(以大肠杆菌为例)学习导航明目标、知重点难点了解培养基的配制过程及培养基的配制原则。(重点)掌握无菌操作和接种技术。(重、难点)[学生用书P9]阅读教材P10～14分析大肠杆菌的接种与分离培养1．配制牛肉膏蛋白胨培养基→→→→→2．斜面接种和培养大肠杆菌斜面接种大肠杆菌的主要目的有菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。具体操作步骤：→→→→→→3．平板划线分离和培养大肠杆菌在实验室中，平板常常被用来培养、分离细菌等微生物。(1)牛肉膏蛋白胨固体培养基的平板制作配制好的培养基装瓶灭菌→倒平板操作(A.打开瓶

2、塞→B.灼烧瓶口灭菌→C.倒培养基→D.倒置平板)(2)平板划线分离与培养大肠杆菌①平板划线法的含义：用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。②注意事项：接种和划线操作时需要在酒精灯火焰附近进行。③培养结果：可以得到由单个细菌增殖而形成的菌落。判一判(1)锥形瓶的瓶口通过火焰灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。(√)(2)平板冷凝后，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(√)(3)制备细菌培养基的操作顺序为配制培养液、调节pH、灭菌、分装。(×)

3、(4)使用已灭菌的接种环、培养基，操作过程中不再灭菌。(×)15连一连　培养基的配制[学生用书P10]利用培养基培养微生物首先要把微生物接种到培养基上，在实验室中，平板常常被用来培养、分离细菌等微生物。结合教材P10～14内容完成以下探究。探究1　下表是牛肉膏蛋白胨固体培养基的成分，请说出各成分提供的营养培养基组分提供的主要营养物质牛肉膏5.0g碳源、氮源、磷酸盐和维生素蛋白胨10.0g碳源、氮源和维生素NaCl5.0g无机盐H2O定容至1000mL氢元素、氧元素探究2　完善下面牛肉膏蛋白胨培养基的配制步骤，学会培养基的配制配制培养基↓调

4、节pH至7.2↓分装：培养基的高度约为试管长度的1/5↓包扎↓15灭菌：高压蒸汽灭菌是常用的灭菌方法之一↓搁置斜面：待试管冷却至50_℃左右，斜面长度不超过试管总长的1/21．培养基的配制原则(1)目的明确：不同微生物需求不同，根据培养目的进行配制。(2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。(3)pH要适宜：为维持pH的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常用磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。2．培养基配制中的注意事项(1)用天平称量时，注意放等大的称量纸。(2)培养基熔化中的注意事项①在琼脂熔化时要不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

5、②熔化后需要先调节pH，再分装，后灭菌。(3)培养基倒平板时的注意事项①培养基灭菌后要冷却到50℃左右时开始倒平板。其原因是琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时高于50℃会烫手，低于50℃时，若不能及时操作，琼脂会凝固。②倒平板时，要使锥形瓶的瓶口通过火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。倒平板整个过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。③平板冷凝后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，培养基表面的温度也较高，平板倒置后，既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污

6、染。④在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。1．下列有关培养基配制原则的表述，正确的是(　　)A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子B．碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受到pH、氧气、渗透压的影响D．营养物质的浓度越高越好解析：选C。培养基中一般含有碳源、氮源、无机盐和水等，有些培养基中还需加入生长因子。培养基中的碳源和氮源要有一定的比例，并不一定

7、碳元素含量最多。营养物质浓度过高会导致微生物失水死亡。152．下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是(　　)A．操作顺序为计算、称量、熔化、搁置斜面、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50℃左右时进行搁置斜面D．斜面培养基形成的斜面的长度不超过试管总长的1/2答案：A　大肠杆菌的接种[学生用书P11]观察下图接种操作程序，学会斜面接种和培养大肠杆菌。准备接种：用一只手的大拇指和其他四指夹住菌种试管，管口并齐，管内培养基斜面向上↓接种环灭菌：手持接种环，将接种环的环端和接种时可能进入试管内的部分放在酒

8、精灯火焰上，来回灼烧多次，以达到迅速彻底灭菌的目的↓试管口灭菌：在火焰边用握有接种环的手的小指、无名指、中指和掌心拔去两支试管上的试管塞，迅速将试管口通过火焰2～3次，以杀灭试管口上的微生物↓