【精品】微生物的培养和利用.doc

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1、微生物的培养和利用来自:全世界晚安与微生物的培养和利用有关的基础知识微生物的概念：形态微小，结构简单，需借助显微镜才能观察到的生物思考：请说出微生物的类群（包括细菌、蓝藻等原核生物、酵母菌、霧菌等真菌、病毒等）微生物所需要的营养物质营养成分主要种类作用碳源CO》、NaHCO3—自养型微生物糖类、脂肪酸等一异养型微生物构成细胞的物质和代谢产物异养型生物的主要能源物质氮源N・2、NHs、鞍盐、硝酸盐尿素、牛肉膏和蛋白豚合成蛋白质、核酸等生长因子（特殊成分）维生素、氨基酸、瞟吟碱和唏唳碱等补充微生物生物必需的微最有机物无机物水无机盐作用同细胞中的水和尢机盐培养基的种类及用途划分依据

2、种类用途物理性质固体培养基分离、鉴别微生物、观察菌落、计数液体培养基扩大培养、工业生产半固体培养基略化学成分合成培养基科研、分离菌种、计数等天然培养基工业生产用途选择培养基筛选微生物鉴别培养基鉴定某种微生物实验室条件下的无菌技术方法应用范围高床蒸汽灭菌培养基、培养皿、移液管等灭灼烧灭菌接种环、玻璃刮刀等接种器具熏蒸灭茵接种室、接种箱等紫外线灭菌接种室、接种箱、超净工作台细菌过滤器加热不稳定的物质消酒精、次氯酸钠等化学试剂实验材料（如外植体）、工作台和器具、培养空间毒高温煮沸微生物培养基本流程培养基的配制和灭菌一称量一溶化一调pH-分装-包扎一灭菌卩酉精灯旁操作I倒完后培养皿立

3、即置于水平位置上，轻晁动，铺满皿底接种一「LB固体培养基一接种环、平板划线ILB液体培养基一接种环、扩大培养+亠美—「固体培养基一倒置，3TC恒温培养箱，24h左右I液体培养基一空气浴或水浴培养箱（揺床），震荡培养

4、固体培养基一划线的末端岀现单菌落冷―1液体培养基一培养液变浑浊注意：使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃。微生物培养的注意事项%1根据微生物的代谢类型、所需营养陀制培养基%1培养时注意：温度、是否需要氧气等微生物的分离（1）平板划线法分离微生物用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，则在划线的过程中菌液逐渐减少，菌体数量也逐渐减少，菌间的

5、距离增大。在培养10・20小时后，划线末处可观察到山-个菌产生的单菌落；如果再挑取它们后，接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是山一个菌产生的后代（或纯种）。（2）液体稀释涂布法分离微生物1对不同时间取样的菌液分别进行稀释（数据表示稀释倍数）（3）利用选择培养基分离微生物利用不同微生物所需的碳源、氮源不同或具有某些抗性进行微生物分离（4）利用鉴别培养基鉴别后挑収培养如：刚果红（CongoRed,简称CR）染料与纤维素形成红色复合物，但不能与纤维二糖、葡萄糖发生颜色反应。在含有纤维素的培养基屮加入刚果红，刚果红能与英屮的纤维素发生反应形成红色复合物

6、，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红一纤维素复合物就无法形成,培养基屮就出现以纤维素分解菌为屮心的透明圈，这样可以通过是否产生透明圈來筛选纤维素分解菌。微生物计数（1）稀释涂布平板法：数菌落数最（2）称重法：已知每个菌体的重量（3）显微观察法：如比例计数法或血球计数板计数等微生物培养和利用的具体实验大肠杆菌的培养和分离思考：1、此实验中获得单菌落的方法是平板划线法2、和对照组（没有接种大肠杆菌的空白液体培养基）相比，液体培养基变浑浊,表明其中有微生物生长。分离以尿素为氮源的微生物【实验原理】⑴利用选择培养基筛选尿素分解菌不同微生物利用氮源种类不同。腺或称尿素，是蛋白质降解的产物

7、。大量的尿素存在対环境造成污染。有一些细菌能合成服酶，通过降解尿素作为英生长的氮源。这类细菌对于自然界中的氮素循环具有重要的意义。（NH2）2C=O+H2O眼酶'2NH3+CO2酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.4〜8.2,在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色，以尿素为氮源的微生物培养一段时间后，山于细菌产生的IK酶向周围扩散，将培养基中的尿素分解，产生的NH,使培养基的pH山原来的中性变为碱性，于是培养基中的酚红山黄色变成红色，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。用液体稀释涂布法测定菌体数量，分离菌种【土样的获得】在有哺乳动物排泄物的地方

8、収得【实验步骤】倒苹板制备土壤稀释液培养基的配制和灭菌一注意：尿素经过细菌过滤器灭菌后加入「LB全营养培养基（对照组门命位创R理鉀「仝右接晋-｛尿素固体培养基（实验组）｝玻璃刮刀、稀释涂布培养一倒置，37匕恒温培养箱，24h左右观察LB全营养培养基一菌落数量和种类多（杂）尿素固体培养基一菌落少、单一，菌落周11出现红色区域观察土壞中能水解纤维素的微生物【实验原理】植物的细胞蔗主要山纤维素、木质素和半纤维素组成。在枯树或草炭土中有许多能利用和分解这些物质作为能虽和物质來源的微生物。他们可以将土壤中的枯枝落