染色体制片方法.doc

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12、(六)植物细胞有丝分裂一、实验目的(1)学习和掌握植物根尖细胞压片技术。(2)观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化。二、实验原理有丝分裂是植物细胞增殖的主要方式，在有丝分裂过程中，细胞核内的染色体能准确地复制，并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样。从而可推断生物性状的遗传与染色体的准确复制和均等分配有关，支配生物性状的遗传物质主要存在于细胞核内的染色体上。高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎生

13、长点及幼叶等部位的分生组织，根尖取材容易，操作和鉴定方便。通过对根尖的固定、染色和压片，可在显微镜下观察到大量处于有丝分裂各个时期的细胞和染色体，看到染色体的变化特点和染色体的形态特征，进行染色体计数。为了获得更多的中期染色体图像，可以采用药物处理或冷冻处理的方法，阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期，同时还可以使染色体缩短，易于分散，便于观察研究。另外，通过对细胞组织进行酸性水解或酸处理除去细胞之间的果胶层，并使细胞软化，便于细胞彼此分开，有利于压片和染色。三、实验材料小麦(TriticumSpp．)、玉米(Zeamays)、大

14、蒜(Aillumsativum)、洋葱(Aillumcepa)、蚕豆(Viciafaba)等。四、实验器具和药品1．器具冰箱，恒温箱，显微镜，水浴锅、分析天平、扭力天平、电炉、温度计、剪刀、镊子、刀片、量筒、量杯、三角瓶、烧杯、漏斗、培养皿、酒精灯、滴瓶、载玻片、盖玻片、滤纸、标签、胶水等。2．药品无水酒精、95％酒精、70％酒精、45％酒精、0.5％醋酸洋红、0.5％苏木精液、4％铁明矾液、苯酚，亚硫酸、二甲苯、秋水仙素、对二氯苯、8-羟基喹啉、α－溴萘、lmol/L盐酸、25％纤维素酶和2.5％果胶酶混合液、加拿大树胶等。五、实

15、验步骤1．培养(1)大蒜和洋葱根尖：将大蒜或洋葱置于盛清水的小烧杯口上，使根茎部与水接触，然后转移到25-28℃的条件下培养．待根尖长到2cm左右时，在上午9－10时剪去根尖约lcm备用。(2)玉米或小麦，蚕豆根尖：用温水将蚕豆种子浸种2天，玉米及小麦种子浸种1天，侍吸水膨胀后转移到铺有几层吸水纸的培养皿或塘磁盘中，上面盖双层湿纱布并加入少许水，放在25-28℃条件下培养．待根尖长到2cm左右时．在上午9一l0时或下午3-5时取下根尖备用。2．预处理为了有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数，在固定之前应对剪下的根尖进行预处理，这样可

16、以改变细胞质的粘度，抑制和破坏纺锤丝的形成．促使染色体缩短和分散。预处理的方法有低温预处理和药物预处理。(1)低温预处理：将剪取的根尖浸入盛有蒸馏水的烧杯内，置于4℃的冰箱中进行低温处理24小时。此法效果很好。对染色体无破坏作用，染色体缩短均匀．简便易行，各种作物都适用。(2)药物预处理：常用药物有秋水仙素溶液、对二氯苯溶液、8—羟基喹啉等。3．固定借助于物理方法或化学药物的作用，迅速渗入组织和细胞将之杀死，使其形态结构和内含物尽可能保持生活时的完整和真实状态。固定时，将预处理过的根尖用蒸馏水冲洗两次(约5分钟)。然后移入卡诺氏固定

17、液中，在4—15℃条件下固定20一24小时后用70％酒精冲洗2次转入70％酒精中．在4℃冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月．经过较长时间保存的材料，进行观察前可以换用固定液再处理一次效果较好。或将预处理过的根尖放入0.075mol/LKCI溶液中低渗20分钟．然后在蒸馏水中冲洗2—3次(约10分钟)待用。4．解离使分生组织细胞间的果胶质分解．细胞壁软化或部分分解．使细胞和染色体容易分散压平。解离有酸解和酶解两种方法：(1)酸解：将根尖从固定液中取出，用蒸馏水漂洗．然后放入已经在60℃水浴锅中预热的1mol/LHCI中，在60℃恒温

18、条件下解离10—15分钟，当根尖透明呈米黄色时取出，用蒸馏水冲洗2—3次。(2)酶解：将根尖从固定液中取出，放在0.1mol／L醋酸钠中漂洗，用刀片切除根冠以及延长区(根尖较粗的蚕豆，可以把分生组织切成2-3片)，把根尖分生组织放到醋酸钠配制的2.5％的纤维素酶和果胶酶的等量混合液中．在25—28℃条件下处理4—5小时。此时组织已被酶液浸透而呈淡褐色，质地柔软而仍可用镊子夹起，用滴管将酶液吸掉．再滴上0.1mol／L醋酸钠，使组织中的酶液渐渐渗出，再放入45％醋酸。5．后低渗将解离后的根尖放在蒸馏水中冲洗2—3次(约10分钟)。酶解

19、后的根尖放入蒸馏水中浸泡10－15分钟，然后再冲洗2—3次。一定要冲洗干净，否则影响染色。低渗后的根尖放入70%酒精后备用。6．染色与压片(1)醋酸洋红染色制片：取一处理好的根尖置于载玻片中间，用吸水纸吸去多余的保存液，用刀片将根尖分