安捷伦1260高效液相操作规程.doc

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1、安捷伦液相1260高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。流动相选择注意事项：①　避免使用高粘度的溶剂作为流动相；②　所选用的流动相一定要与样品相溶；③　各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a.正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中

2、各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（MethyleneChloride）等。b.反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。91.准备工作①　用于液相色谱分析的

3、样品溶液使用前要经过0.15µm过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；②　流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③　在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）2.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D泵根据需要添加。注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。（二）先打开计算机登陆windows操作系统，再将仪器的泵、色谱柱、检测器打开，待计算

4、机界面显示连接好后，双击桌面“联机”图标，进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。9模块右上角状态灯颜色说明：无色，未开电源或者模块准备就绪黄色，模块未准备就绪　　　　　　　　　　　　绿色，正在进样分析　　红色，模块出错所有模块红色，仪器有漏液工作站图形颜色说明：　　绿色，模块准备就绪黄色，模块未准备就绪　　　　　　　　　　　　蓝色，正在进样分析　　　　　　　　　　　　　红色，出错或者不能联机灰色,此模块没启用9等度洗脱：直接选择比； 梯度洗脱：在中设定好初始比例，再点击，设置一定时间内不同的比例。 方法如下: 前10min中，A：B=10:90 第10-

5、15min中，用B:100% 第15-30min，A逐渐增加到20%，B逐渐减少80%。 设置：10min，A：B=10:90； 10.1min，　B:100%； 15min，A:B=0：100%； 30min，A:B=20：80（一）右击四元泵界面：选择“瓶填充”点击“溶剂瓶填充量”设置溶剂瓶中流动相实际体积，也可设定低体积关泵。旋开排气阀（逆时针），点击“方法”选项进入泵编辑的画面。将泵的流量设到5ml/min,溶剂A设到100%，打开泵，观察排出管线中的气体，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无其起泡为止，查看柱前压力（若大于10bar，则应更换排气阀内的过滤白头）。依次切换到

6、B、C、D溶剂分别排气。9（一）将泵的流速调到0.5ml/min,设定四元泵最初的溶剂比例，如A=80%，B=20%；关闭排气阀。（二）再将流速设定到所需流量，待压力视数稳定，打开检测器灯，观察基线情况。注：若反复几次检测器显示错误，右击“视图”中的“工作日志”“当前工作日志”查看是什么错误。以上步骤用文字也可描述为1)打开计算机，登陆windows操作系统。2)打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。3)把各流动相放入溶剂瓶中。4)旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标

7、出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。将泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%，打开泵，排出管线中的气体2—3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力（若大于10bar，则应更换排气阀内过滤白头）。5)依此切换到B、C、D溶剂分别排气。6)将泵的流量设到0.5ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）。7)再将泵的流量设到0.8ml/min，2分钟后将泵的流量设到1ml/min，冲洗色谱柱20—30分钟。8)把缓冲液换成流动相，待柱前