实验三 茎尖培养技术.ppt

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1、实验三植物茎尖培养技术2017年一、概念和意义1.概念茎尖培养（shoottipculture）的含义比较广，包括小到10－100μm的茎尖分生组织的培养，大到几十毫米的茎尖或更大的芽的培养。一般培养材料体积小（茎尖分生组织），成苗较难，成苗所需时间较长；而培养材料体积大，成苗速度快，但污染率也较高。种苗离体快速繁殖2.意义茎尖培养在园艺植物的组织培养中应用广泛，主要用于种苗快速繁殖、脱毒苗的生产、品种改良和基础理论研究。茎尖分生组织培养脱除病毒二、实验目的：学习并掌握植物茎尖离体培养的原理和方法；学习并掌握无菌操作技术。三、实验原理：以茎尖为外植体,经过表面灭菌

2、处理后，接种于诱导培养基上，促进茎尖萌发成苗，获得无菌系，并可在适当浓度的植物激素和生长调节剂的作用下进一步增殖和生根，获得完整植株。茎尖培养包括起始培养、增殖培养和生根培养及驯化移栽等阶段，不同培养阶段要求不同的植物激素和生长调节剂条件。增殖培养生根培养驯化移栽起始培养四、实验材料：1.植物材料：大蒜和不结球白菜；2.培养基：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖3%+琼脂6.5g/L。3.试剂：75%的乙醇，1%有效氯次氯酸钠、无菌水。4.器材：酒精灯、培养皿、灭菌滤纸、镊子、解剖刀等。五、实验步骤：外植体的准备：大蒜：剥去蒜瓣的外皮。不

3、结球白菜：去除老化叶片，保留1-2片幼叶的叶柄；洗净后在流水中冲洗10-20分钟。2.表面灭菌：在超净工作台上将外植体材料放到灭过菌的罐头瓶内，加入75%的乙醇处理不超过30秒，然后倒出，加入1%的次氯酸钠灭菌（小白菜10min，大蒜处理20min），处理后用无菌水洗4-5次。3.茎尖分离及接种：用镊子和解剖刀在灭菌滤纸上分离茎尖，用镊子将分离的茎尖组织接种到培养基上，盖好瓶盖，贴好标签。不结球白菜茎尖大蒜茎尖培养不结球白菜茎尖培养4.接种材料的培养：接种后的材料放到培养室，25℃，12h光照/12h黑暗条件下培养，3-4天可以观察到茎尖开始萌发生长。六、无菌操作

4、注意事项：1.保持接种室整洁卫生，穿上鞋套。2.超净台的准备：超净工作台使用前用75%的乙醇擦拭。打开紫外灯照射20-30分钟，然后关闭紫外灯，打开鼓风机20分钟左右排出臭氧等气体。3.接种前用75%乙醇擦拭手和手臂，以减少污染。待手上酒精干后，点燃酒精灯，再开始操作。4.接种未灭菌用品用酒精棉擦拭，用品摆放合理。5.接种过程中工具应充分灼烧，镊子、解剖刀及瓶口要在酒精灯上灼烧。每切完一个外植体，每接种完一瓶外植体，镊子、解剖刀都在酒精灯上烧一次。6.实验完成后，整理超净台，清洁实验用品。七、思考题：1.以种苗快繁为目的的茎尖培养包括哪些阶段，各个阶段对培养基条件

5、有哪些要求，外植体选取要注意哪些问题？2.无菌操作过程中需注意哪些问题？