[精品]草莓茎尖培养.doc

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1、草莓茎尖培养%1.材料与试剂：草莓新梢、90%酒精、70%酒精、0.1%升汞、无菌水、培养基%1.仪器与用具：蹑子、酒精灯、滤纸、培养皿、三角烧瓶、解剖镜、接种环、剪刀、解剖针、解剖刀、烧杯、废液缸、高压灭菌锅(121°C,,20min)%1.试验流程：1.配制培养基：在MS+BA0.25mg/L+NAA0・25mg/L屮加入3%蔗糖、8g琼脂混合后煮沸并把PH调到6.0,然后分装到接种瓶中封装(或White+IAA0.1mg/L)2.消毒：1.用蘸酒精的棉球擦拭工作台面然后把无菌操作需要的各种用到的物品放入超净工作台屮2.依次打开工作电源、风机和紫外线灯开关，30min后关闭

2、紫外线灯开关3.剪取5cm左右长的新梢顶芽，用手剥去外层大叶，流水冲洗2〜6h4.用70%乙醇处理3〜5s,无菌水冲洗1次(或用0.5%次氯酸钠溶液表面消毒5min,并不停地搅动促进药液的渗透)5•用0.1%的升汞浸泡2〜lOmin,无菌水冲洗3次6.放入铺有滤纸的培养皿中待用3.剥取茎尖:1.在超净工作台上把解剖镜放大倍数调到较小2.将培养皿置于解剖镜中央，调节旋钮，使茎尖在视野中清晰3.一只手用银子将其按住，另一只手用解剖针将叶片和叶原基剥掉,解剖针要常常蘸入90%酒精，并用火焰灼烧以进行消毒。解剖针的冷却，可蘸入无菌水进行冷却。4.当一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出

3、來之后，用解剖刀片将分生组织切下来0.2mm的茎尖，为了提高成活率，可带1-2枚幼叶，然后将其接到培养基上。5.剥离茎尖时，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。可在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，有助于防止茎尖变干。4.接种：将剥取的茎尖直立向上接种到培养基上，每管1个茎尖5.初代培养：温度25°C光照强度20001X连续16h光照湿度适宜即可6.继代增殖：MS+IBA0.05mg/L+6-BA0.5〜1.0mg/L（单芽）7.生根培养：1/2MS+IBA0.2〜l.Omg/L