实验三 茎尖培养技术.ppt

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1、实验三植物茎尖培养技术一、实验目的：学习并掌握植物茎尖离体培养的原理和方法；学习并掌握无菌操作技术。二、实验材料：1.大蒜、小白菜；2.培养基：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖3%+琼脂7.0g/L。3.75%的乙醇，1%次氯酸钠。4.酒精灯、培养皿、灭菌滤纸、镊子、解剖刀等。三、实验原理：以茎尖为外植体经表面灭菌处理后，接种于诱导培养基上，促进茎尖萌发成苗，获得无菌系，并可在适当浓度的植物激素和生长调节剂的作用下进一步增殖和生根，获得完整植株。茎尖培养包括起始培养、增殖培养和生根培养及驯化移栽等阶段，不同培养阶段要求不同的植物激素和生长调节剂条件。茎尖培养

2、主要用于优质种苗和脱毒种苗的繁殖。四、实验步骤：外植体的准备：去除老化叶片，保留1-2片幼叶，洗净后在流水中冲洗10-20分钟；注意选取幼嫩茎尖，大小要适当；选取生长旺盛的茎尖。2.表面灭菌：将茎尖材料放到灭国菌的罐头瓶内，加入75%的乙醇处理30秒，然后倒出，加入1%的次氯酸钠灭菌10分钟（大蒜处理20min），处理后用无菌水冲洗4-5次；3.茎尖分离及接种：用镊子和解剖刀分离茎尖，用镊子将分离的茎尖组织接种到培养基上，盖好瓶盖，贴好标签。4.接种材料的培养：接种后的材料放到25℃，12h光照条件下培养，3-4天可以观察到茎尖开始萌发生长。五、无菌操作注意事项：1.保持接种室的洁净,

3、使用前打开紫外灯照射20-30分钟，然后关闭紫外灯，排出臭氧等气体；2.超净工作台使用前用75%的乙醇擦拭，打开鼓风机20分钟左右；3.接种前用品摆放合理；4.接种过程中工具应充分灼烧，镊子、解剖刀及瓶口要在酒精灯上灼烧；5.接种前用75%乙醇擦拭手和手臂，以减少污染。六、思考题：1.以种苗快繁为目的的茎尖培养包括哪些阶段，各个阶段对培养基条件有哪些要求，外植体选取要注意哪些问题？2.无菌操作过程中需注意哪些问题？2011年4月19日