【实验一】生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定.ppt

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1、【实验一】生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定【实验一】生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定1、可溶性还原糖的鉴定原理：（1）生物组织中普遍存在的可溶性还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖，分子内都含有游离的具有还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原性糖；（2）用斐林试剂只能检验生物组织中可溶性的还原糖的存在与否。斐林试剂由质量浓度为0．1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0．05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu（OH）2沉淀。Cu（OH）2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀

2、（3）用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色—棕色—砖红色（沉淀）。【实验原理】2、蛋白质的鉴定原理（1）鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0．1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0．01g／mL的硫酸铜溶液。在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与铜离子作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。3．脂肪鉴定的原理：苏丹III染液遇脂

3、肪的颜色反应为橘黄色，苏丹IV染液遇脂肪的颜色反应为红色。4、淀粉的鉴定：淀粉遇碘变成蓝色。化合物试剂反应颜色注意事项还原糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖）斐林试剂砖红色沉淀甲、乙液要现混合现用、还要50-65℃水浴加热蛋白质双缩脲试剂紫色无需加热、但A液和B液要分开使用、先加A液、后加B液脂肪苏丹III染液（苏丹IV染液）橘黄色（红色）要用高倍显微镜观察淀粉碘蓝色煮2分钟还原糖的鉴定：【实验步骤】脂肪的鉴定：先用低倍镜观察，后用高倍镜观察染色2-3分钟显微镜下的脂肪颗粒蛋白质的鉴定：观察颜色变化1．实验成功的关键在于实验材料的选择。（1）可溶性还原

4、糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织（或器官），而且组织的颜色较浅，或近于白色的。经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。（2）脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功。（3）蛋白质的鉴定实验，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋白。【实验成功的关键及注意事项】（1）斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液（0．1g/mL的NaOH溶液）和乙液（0．05g/mL的CuSO４溶液）分别配制、储存，使用时，再临时配制，将4～5滴乙液滴入

5、2mL甲液中，配完后立即使用。（2）双缩脲试剂的使用，应先加试剂A（0．1g/mL的NaOH溶液），造成碱性的反应环境，再加试剂B（0．01g/mL的CuSO４溶液）。（3）在蛋白质的鉴定实验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易洗刷。（4）在鉴定脂肪的实验中，若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡3～4小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，染色时间不宜过长。【注意事项】