《月季的花药培养》课件(新人教版选修1).ppt

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1、月季的花药培养制作者：方可1、被子植物定义：凡是种子有果皮包被着，胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物一、被子植物和裸子植物2、裸子植物定义：凡是胚珠裸露，外面没有子房壁包被，种子外面没有果皮包被的植物称为裸子植物实例：玉米、大豆、梨、杏实例：松、杉、柏3、花的结构花的结构：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊4、花的作用被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要部分二、被子植物花粉粒的形成花丝花药：囊状结构，内有很多花粉粒1、雄蕊的结构雄蕊：花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞2、被子植物的花粉发育②花粉粒的形成花粉母细胞（

2、小孢子母细胞）减数分裂①经历时期：四分体时期、单核期、双核期四分体时期（进入单核期）有丝分裂单核靠边期(小孢子)单核居中期(小孢子)小孢子（单核花粉粒）精子精子有丝分裂花粉管细胞核生殖细胞核生殖细胞营养细胞双核期两个精子和一个营养核的基因型相同1花粉母细胞4个小孢子减分有分4个花粉管细胞核4个生殖细胞核有分8个精子花粉落到雌蕊柱头上以后，在柱头上黏液的刺激下，花粉开始萌发并形成花粉管，花粉管沿着花柱向胚珠方向生长，到达胚珠后从珠孔绕过卵细胞进入胚囊，到达胚囊中卵细胞和极核之间，这时花粉管的前端破裂，两个精子释放出来，其中一个精子与两个极核结合形成受精极核，另一个精子与卵细胞结合形成

3、受精卵，这是被子植物特有的双受精现象4、受精过程三、产生花粉植株的两条途径四、影响花药培养的因素1、材料的选择接种的花药时期不同植物的诱导成功率很不相同，就同一种植物来说亲本的生理状况对诱导成功率也有直接影响②选择合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的重要因素因为并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体，花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。选材是否成功是花药培养成功的关键①选材一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养的成功率最高。即：最适合花药培养的小孢子发育时期为单核靠边期选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎；选择单核期之后的花

4、药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核期的花药。③花药培养时期的选择④其它时期选择的缺点⑦花药培养时间为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。盛开的或略微开放的花，都不宜选作实验材料。⑥选择完全未开放花蕾的原因完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒⑤单核期花药的挑选一般月季的花药培养时间选在五月初到五月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及生理状态会比较好，可能提高花粉的诱导成功率月季花药培养时的花粉粒最好是（）A、四分体时期B、单核居中期C、单核靠边期D、二核或三核花粉粒C2、其他因素亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以

5、及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响五、实验操作（一）材料的选取②某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。①最常用的方法有醋酸洋红法1、方法①醋酸洋红法染色机理醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色。将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。②醋酸洋红的配置2、醋酸洋红法将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。③染色操作3、焙花青—铬钒法将无水酒精与冰醋酸按体积比为3

6、：1的比例混匀①卡诺氏固定液的配制方法花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。②焙花青—铬钒溶液的配制方法③染色操作（二）材料的消毒1、酒精处理①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。②无菌水清洗③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分2、消毒液处理（三）接种和培养①放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的

7、次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）②无菌水冲洗3~5次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成取出花药后立即将其接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。1、剥取花药①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织2、接种注意：①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。