苎麻atp2基因RNA干扰表达载体的构建及其干扰效果初步研究.pdf

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1、分类号密级公开编号碛士蚵究嗲依恰夂题目苎麻咖基因干扰表达裁体的构建及其干扰果初步研究学院（所、中心）生命糾学学院专业名称植物学研究生姓名林娜学号导师姓名刘飞虎职称教授年月论文独创性声明及使用授权本论文是作者在导师指导下取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研宄成果，不存在剽窃或抄袭行为。与作者一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。现就论文的使用对云南大学授权如下：学校有权保留本论文（含电子版），也可以采用影印、缩印或其

2、他复制手段保存论文；学校有权公布论文的全部或部分内容，可以将论文用于查阅或借阅服务；学校有权向有关机构送交学位论文用于学术规范审查、社会监督或评奖；学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。内部或保密的论文在解密后应遵循此规定）摘要合成酶在线粒体中作为第复合体参与电子传递链，是合成的重要复合酶，其中部分的亚基，是合成与水解的关键位点，在高等植物中由核基因中基因编码，在各物种间高度保守。合成酶分布异常或供应不足，常伴随着雄性不育发生，但由于植物雄性不育是一个复杂的生物学过程，其作用机制目

3、前还不清楚。本研究，通过克隆苎麻保持系旧乂’的《炉基因片段，构建干扰表达载体，以农杆菌介导转化苎麻及烟草获得以下研究结果：通过引物筛选，克隆到苎麻保持系‘’的基因片段，构建苎麻呻基因干扰表达载体，通过序列比对确认载体构建成功。将构建好的干扰表达载体，通过农杆菌介导转化苎麻，结果苎麻叶盘全部褐化死亡未能获得转基因苎麻植株，苎麻的遗传转化体系还有待优化。将所构建的苎麻如基因干扰表达载体转化普通烟草，获得转基因烟草株，通过验证其基因的相对表达量均比对照组烟草低。普通烟草沉默基因之后植株变矮小，叶绿素分布不均，易

4、感病，其花结构与对照组相比花冠筒较短，雄蕊不能伸出花冠筒喉部，雌性生殖器官无明显异常。通过花粉萌发实验，测得转基因烟草花粉萌发率较对照组烟草下降了花粉管长度下降了，转基因烟草表现出部分雄性不育。检测烟草叶片及大花蕾的脯氨酸含量及活性，结果表明转基因烟草大花蕾中的脯氨酸含量比对照组低而叶片中的脯氨酸含量相比对照组高；转基因烟草叶片及大花蕾的活性高于对照组烟草。转基因烟草自交并收获部分种子，种子发芽率较对照组烟草下降了。本研宄通过构建叫基因干扰表达载体以农杆菌介导转化苎麻及烟草，终获得转基因烟草株，在植株形态

5、、花粉育性、种子萌发、脯氨酸含量及活性等方面与对照组表现出显著差异。关键词：苎麻，烟草干扰，花粉育性AbstractFiFq-ATPsynthaseisanimportantATP-synthesizingenzymeastheVcomplexinvolvedintheelectrontransportchaininmitochondrion.ThepsubunitofF]isthekeysiteofATPsynthesisandhydrolysisencodedbynucleargenesatp2inh

6、igherplantsandhighlyconservedinallspecies.Usually,deficiencyorabnormaldistributionofATPsynthaseisassociatedwithmalesterility,acomplicatedbiologicalprocesswithunclearmechanisms.WeconstructedRNAiexpressionvectorsusingatp2fragmentclonedfromramiemaintainer‘’】

7、）‘’，lowerthanthecontrol,whileprolinecontentsinleavescomparedtothecontrolincreasedby95.08%,SODactivityintransgenictobaccoleavesandbudswerehigherthanthecontroltobacco.(7)Weharvestedsomeseedsfrominbredtransgenictobaccototestthegerminationratethatwas74.23%low

8、erthanthecontrol.Inthisstudy，，，目录录第一章引言叫基因的功能研究合成酶合成酶亚基的研宄进展植物雄性不育植物雄性不育的定义合成酶与植物雄性不育干扰在植物雄性不育研宄的应用本研究的目的及意义第二章材料与方法实验材料、试剂和仪器设备实验方法苎麻总提取引物设计和扩增苎麻基因目的基因连接载体并转化大肠杆菌苎麻基因干扰表达载体的构建农杆菌介导苎麻基因干扰载体转化苎麻和烟草转基因植株分子鉴定转基因植株生理生化指