新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体的构建.pdf

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1、检验医学与临床2014年11月第11卷第21期LabMedClin，November2014。Vo1．11．No．21·论著·新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体的构建渠志臻，刘珊，王艳艳，高乃康。，呼格吉乐tA(内蒙古医科大学附属医院：1．检验科；2．神经外科，呼和浩特010050)【摘要】目的构建4个新靶点的人CyclinE干扰RNA真核表达载体，转染人脑胶质细胞瘤U251细胞，经反转录一聚合酶链反应(RT—PCR)检测mRNA表达，获得干扰效果最好的真核表达载体，为CyclinE成为人脑肿瘤标志物提供有价值的资料。方法(1)

2、构建4个新靶点CyclinE干扰RNA的真核表达载体后，用双酶切和碱基序列测定的方法鉴定载体构建成功与否；(2)用Lipofectamine2000转染4个成功构建的载体到胶质瘤U251细胞株；(3)通过RT—PCR的结果检测转染后CyclinEmRNA表达量，选出干扰效果最好的1个。结果(1)成功构建了4个新靶点的CyclinE干扰RNA真核表达载体即P～、pCy、P。。、P“。(2)CyclinEmRNA表达明显受到抑制，并获得效果最好的CyclinE干扰RNA真核表达载体。结论成功构建并筛选出效果最好的新靶点Cy—clinE干扰R

3、NA真核表达载体，使U251细胞的CyclinEmRNA表达明显降低。【关键词】干扰RNA；新靶点；细胞周期蛋白E；胶质瘤DOI：10．3969／j．issn．1672-9455．2014．21．006文献标志码：A文章编号：1672-9455(2014)21—2958'02ConstructionofnewtargeteukaryoticexpressionvectorsofCyclinEsiRNAQUZhi—zhen，LI【，Shan，WANGYan—yan，GAONai—kang，HUGeji—le(1．DepartmentofL

4、aboratoryMedicine；2．DepartmentofNeurosurgery，A_厂一filiatedHospitalofNeimengguMedicalUniversity，Huhehaote，Neimenggu010050，China)[Abstract]ObjectiveToconstructthe4newtargetseukaryoticexpressionvectorsofhumanCyclinEinterfer—encespecificRNAtotransfectintogliomaU251cells，themR

5、NAexpressionwasdetectedbyRT-PCR，forobtainingtheukaryoticexpressionvectorswiththebestinterferenceeffecttoprovidethevaluabledataforCyclinEbecomingthehumantumormarker．Methods(1)FournewtargetseukaryoticexpressionvectorsofRNAinterferencespecificCyclinEwereconstructed，namedasP

6、“，P，P。“‘。andP．Thedoubledigestionmethodandthebasesequencemeasuringwereadoptedtodetectwhetherthevectorsweresuccessfullyconstructed．(2)ThefournewlyconstructedvectorsweretransfectedintoU251cel11inebyLipofectamine2000：(3)TheRT—PCRresultswasadoptedtodetecttheexpressionquantity

7、ofCyclinEmRNAforselectingavectorwithbestinterference．Results(1)4newtargetseukaryoticexpressionvectorsofRNAinterferencespecificforCyclinEwereconstructed．(2)CyclinEmRNAwasobviouslysuppressed，theeukaryoticexpressionvectorwithbestinterferenceeffectforhumanCyclinEinterfer-enc

8、especificRNAwasobtained．ConclusionTheneweukaryoticexpressionvectorofCyclinEsiRNAwithbesteffectissuccess