分散固相萃取净化与液相色谱∕串联质谱法测定牛奶中8类禁用药物残留.pdf

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1、第40卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第5期2012年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry724～729分散固相萃取净化与液相色谱／串联质谱法测定牛奶中8类禁用药物残留张毅岳振峰蓝芳赵凤娟肖陈贵欧阳姗吴卫东吴永宁李丽苏(深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心，深圳518045)(中国疾病预防控制中心营养与食品安全所，北京102206)摘要建立了牛奶中8类禁用药物的液相色谱一串联质谱(LC—MS／MS)检测方法。分析物包括5种硝基咪唑、7种受体激动剂、9种

2、雄性激素、7种糖皮质激素、3种雌性激素、2种镇静剂、1种氯霉素以及6种二羟基苯甲酸内酯共40种禁用药物。样品以葡萄糖苷醛酶／芳基硫酸酯酶在乙酸铵缓冲液中酶解，用氨化和酸化乙腈各提取一次。提取液经改良的分散固相萃取(QuEChERS)净化，浓缩后采用C。色谱柱分离(150mm×2．1mmi．d．，3．0um)。以甲醇和水(含0．1％甲酸)、乙腈和水分别作为正、负电喷雾离子化模式的色谱分离流动相进行梯度洗脱，多反应监测模式进行定性和定量分析。7种药物以内标法定量；33种药物以基质标准曲线一外标法定量，氯霉素在

3、0．02~0．4~tg／kg；39种药物在0．2O～10．0~tg／kg范围内相关系数(r)均大于0．99；定量限(s／N一10)在O．07～O．93gtg／kg之间。分别以各个药物O．5，1和2倍MRPL(Minimumrequiredperformancelimits)浓度水平加标验证实验，回收率范围60．3％～119．3％范围；相对标准偏差小于18．9％。关键词硝基咪唑；p-受体激动剂；雄性激素；糖皮质激素；雌性激素；镇静剂；氯霉素；二羟基苯甲酸内酯；牛奶；液相色谱一串联质谱；分散固相萃取l引言受体

4、激动剂、合成激素和二羟基苯甲酸内酯类药物具有增加饲料转化率、增加蛋白沉淀的作用，曾广泛用于动物的促生长和育肥。】。氯霉素、硝基咪唑【4属于抗菌和抗原虫类药物，常用于禽畜类疾病和感染的预防和治疗。镇静剂能抑制脑干及大脑皮质活动，可使动物嗜睡以减少运输或屠宰中的损耗]。已有研究表明，上述几类药物在动物肌肉、内脏及相关产品中的残留可能对消费者造成中毒、抗药性、致癌、致畸和致突变性等损害】。我国农业部235号公告明确规定，在动物性食品中不得检出氯丙嗪、地美硝唑、甲硝唑、丙酸睾酮等治疗药物，禁止将氯霉素、克伦特罗、

5、洛硝达唑、己烯雌酚、玉米赤霉醇等药物用于食源性动物[91。许多国家和地区已将这些药物列为禁用药物口”]。然而受到利益驱使，近年来滥用违禁药物造成动物源食品中药物残留超标的食品安全事件频见报道。建立动物源食品中多类禁用药物的筛查和测定方法有利于提高效率、减少处理步骤和降低成本[1。然而，禁用药物的残留浓度低、不同类型药物的理化性质差异大、基质复杂干扰大，故样品前处理是多残留分析的难点之一。本课题组参考以分散固相萃取用于饲料中多种激素分析的研究，采用改良的QuEChERS方法结合LC—MS／MS分析，建立了牛

6、奶中8类禁用药物多残留的筛查和定量方法。相比现有方法具有更高的效率、更简便的前处理过程，且各项性能满足残留分析要求。2实验部分2．1仪器与试剂API5000型四级杆串联质谱仪配电喷雾离子源(美国AB公司)；1200型高效液相色谱仪和EclipsePlusC18色谱柱(150mmX2．11TlIn，3．0“m，美国Agilent公司)；漩涡振荡混合器(美国Thermo公司)；Sigma低温离2011一O9_26收稿；201卜11—15接受本文系国家自然科学基金(No．21107074)、中国博士后基金(No

7、．20100480361)和深圳出入境检验检疫局博士后基金(No2010101)资助项目*E—mail：yuezhenfeng@163．corn第5期张毅等：分散同相萃取净化与液相色谱／串联质谱法测定牛奶中8类禁用药物残留725心机(美国Sigma公司)；旋转蒸发浓缩仪(德国Heidolph公司)；Gilson移液器(法国Gilson公司)。40种标准物质和7种同位素内标物质(纯度≥99％)购自美国SigmaAldrich公司、德国Dr．Ehren～storfer公司和WITEGA公司。葡糖苷醛甙酶一芳基

8、硫酸酯酶德国HelixPomatia公司)；甲醇、乙腈、乙酸乙酯和甲酸(HPLC纯，德国Merck公司)；乙酸铵(HPLC纯，美国Fisher公司)；丙基乙二胺吸附剂(PSA)、十八烷基键合硅胶吸附剂(c。)、佛罗里硅土、石墨化碳黑(GCB)(天津博纳艾杰尔公司)。2．2标准溶液和缓冲溶液的制备称取各标准物质10mg(精确到0．1mg)，以甲醇(或乙腈)配制成浓度100．0mg／L的单标储备溶液。按药物分类稀释为10．0mg／