实验一 培养基母液的制备.doc

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1、实验一培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元索、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。二、实验器材电光分析天平（感量为O.OOOlg）、扭力天平（感量为O.Olg）、帥感量0.5g）、琳（500ml、100ml、50ml）、容量瓶（1000mK100ml、50ml、25ml）、细I瓶（1000mk100ml、50ml、25ml）、药勺、玻璃棒、电炉。三、实验药品

2、NH4NO3、KNO3xCaCl2-2H2O.MgSO^HgO'KHzPOq、KI、H3BO3.MnSO4-4H2O^ZnSO4-7HoOsNaoMoO4-2H^O、CuSO4・5H°O、CoCb6H°O、FeSO4・7HQ、Na”EDTA・2H°O、肌醇、烟酸、盐酸毗哆醇（维生素B6）、盐酸硫胺素（维生素BJ、甘氨酸。U!、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍，用感量为0.0lg的扭力天平称取，用蒸憎水分别溶解，按顺序逐步混合。示用蒸镭水定容到1000ml的容量瓶屮，即为10倍的大最元素母液。到

3、入细口瓶，贴好标签保存于冰箱屮。配制培养基时，每配1L培养基取此液lOOmU表1MS培养基大量元素母液制备序号药品名称培养基浓度（mg/L）扩大10称量（mg）1nh4no31650165002kno3190019000蒸饱水定3CaCl2-2H2O4404400容至4MgSO4-7H2O37037001000ml5KH2PO41701700注意:（1）配制大量元素母液时，某些无机成分如C0、so厂、和h2PO4等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馅水溶解，药品采用等级较高的分析纯，

4、各种化学药品必须先以少量重蒸馄水使其充分溶解麻才能混合,混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2SO厂、Mg21>fnH2PO4-等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。（2）CaCl2-2H2O要在战后单独加入，在溶解CaCl2-2H2O时，熬僧水需加热沸腾，除去水中的CO2,以防沉淀。另外，CaCl2-2H2O放入沸水屮易沸腾，操作时要防止其溢出。2、微量元素母液的配制MS培养基的微最元素无机盐由7种化合物（除Fe）组成。微量元素用最较少，特别是CuSO4-5H2O.CoC126H2O,因此在配制中分微量［、II配制。按照表2

5、,表3配方,用感量为0.000lg的电光分析天平称量，其它同大量元索。配制培养基时，每配制1L培养基,取微量I10ml,微量II1ml表2MS培养基微量I的配制序号化合物名称培养基浓度(mg/L)扩大100倍称量(mg)1MnSO4-4H2O22.322302ZnSO4-7H2O8.68603H3BO36.26204KI0.83835Na2MoO4-2H2O02525表3MS培养基微量II的配制序号化合物名称培养基浓度(mg/L)扩大1000倍称量(mg)1CuSO4-5H2O0.025252CoC12-6H2O0.02525注

6、意:使用电了分析天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球将天平内的脏物清理干净。3、铁盐母液的配制铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，乂比较稳定，不易发生沉淀。配制方法同上，直接用蒸馆水加热搅拌溶解。配制培养基时，配制1L取此液lOmU表4MS铁盐母液的配制序号化合物名称培养基浓度(mg/L)扩大100倍称量(mg)1Na2-EDTA37.337302FeSO4-7H2O27.82780注意

7、：在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeS04会结晶析出。为避免此现彖发生，配制铁盐母液时，FeS04和Na2EDTA应分别加热溶解麻混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20・30min),调pH值至5.5,室温放置冷却后，再冷藏。4、有机母液的配制MS培养基的有机成分有廿氨酸、肌醉、烟險盐酸硫胺索和盐酸毗哆索。培养基屮的有机成分原则上应分别单独配制。配制肓接用蒸馅水溶解，注意称量时用电了分析天平。注意：由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。被

8、菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给示期培养造成伤害，不宜再用。避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸懾水溶解维生索，并贮存在棕色无菌瓶屮，或缩短贮藏时间。表5MS培养基有机物质母液的制备序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大倍数称量(mg)配制