培养基母液的制备

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1、目录15实验一培养基母液的制备…………………………………………………1实验二培养基的配制与灭菌………………………………………………6实验三无菌操作及种子无菌播种…………………………………………9实验四激素对器官分化及愈伤组织诱导的影响…………………………13实验五茎尖培养与脱毒……………………………………………………16实验六有丝分裂制片技术和显微观察……………………………………18实验七植物多倍体细胞的诱发与鉴定……………………………………22实验八植物组织总DNA的提取与测定……………………………………24实验九毛状根培养…………………………………………………………27附录……………

2、…………………………………………………………3215精选内容实验一培养基母液的制备一、实验目的学习和掌握培养基母液的配制方法和注意事项。二、实验原理培养基的主要成分包括无机营养物质、碳源、有机物质、植物生长物质等，由于每种培养基往往含有一二十种化合物，配制起来不仅繁琐，而且还很难达到准确和精确，尤其是生长调节物质和微量元素用量较少，难于准确称量，稍有偏差，就会影响试验结果及试验的重复性。为解决这一问题，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。三、实验药品和试剂NH4NO3、KNO3、M

3、gSO4·7H2O、（NH4）2SO4、NaH2PO4·H2O、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、Na2-EDTA·2H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(VB6)、盐酸硫胺素(VB1)、甘氨酸、蔗糖、琼脂四、实验仪器及用具电子天平（感量为0.0001g）、扭力天平（感量为0.01g）、烧杯（1000ml、500ml、100ml、50ml）、量筒（500ml、25ml）、容量瓶（1000ml、500ml、100ml）、

4、试剂瓶（1000ml、500ml、100ml）、药勺、玻棒、电炉、石棉网。五、实验方法与步骤15按组分别配制MS、B5培养基母液，下面以MS培养基母液配制为例进行介绍。1、大量元素母液的配制（母液1）各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍，扭力天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。倒入试剂瓶，贴好标签，注明每配1L培养基需取此液100ml。保存于冰箱中。表1MS培养基大量元素母液制备（母液1）序号药品名称培养基浓度（mg/L）扩大10倍称量(mg)1NH4NO3165016500蒸馏水定容至1000ml2KNO319

5、00190003CaCl2·2H2O44044004MgSO4·7H2O37037005KH2PO41701700注意：配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。2、微量元素母液的配制（母液2、3）MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除铁）组成。微量元素用量较少，特别是CuSO4·5H2O、CoCl2·

6、6H2O，因此在配制中分母液2、3配制。按照表2，表3配方，用感量为0.0001g的电光分析天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取母液2为10ml，母液3为5ml。表2MS培养基微量Ⅰ的配制（母液2）序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大50倍称量(mg)1MnSO4·4H2O22.31115蒸馏水定容至15500ml2ZnSO4·7H2O8.64303H3BO36.23104KI0.8341.55Na2MoO4·2H2O0.2512.5表3MS培养基微量Ⅱ的配制（母液3）序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大100倍称量(mg)1CuSO4·5H2O 0.02

7、52.5蒸馏水定容至500ml2CoCl2·6H2O  0.0252.53、铁盐母液的配制（母液4）目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。配制方法同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解。在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA螯合不彻底，此时若将其冷藏，FeS04会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeS04和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并不断搅拌至溶液呈金黄