高效液相色谱法鉴别及测定中药吴茱萸中的生物胺.pdf

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1、第42卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第2期2014年2月ChineseJournalofAnalyticalChemistry273～277DOI：10．3724／SP．J．1096．2014．30930高效液相色谱法鉴别及测定中药吴茱萸中的生物胺孙艳妮张宁王翠玲刘竹兰王征刘建利(西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西北大学生命科学学院，西安710069)摘要建立了高效液相色谱法(HPLC)测定中药吴茱萸中生物胺的方法。以丹磺酰氯为柱前衍生试剂，采用岛津高效液相色谱仪(LC．10A)，色谱柱SHIMADZU．C(150mm×4．6mm~5m)进行测

2、定，确定了最佳色谱条件：乙腈和水为流动相，梯度洗脱，DAD检测器，检测波长为334nm，流速为0．8mL／min，柱温30℃，进样量20。10种常见生物胺在45min内得到良好的分离，在给定的浓度范围内，各生物胺呈现良好的线性相关(R>O．999)，精密度RSD<2％，回收率在91．87％～101．35％之间，重现性RSD<8％。结果表明，吴茱萸叶中含有7种生物胺，枝中含有4种，果中含有5种。这是首次发现在中药吴茱萸中存在生物胺类成分。关键词生物胺；吴茱萸；衍生化分析；高效液相色谱1引言吴茱萸是芸香科植物吴茱萸Evodiarutaecarpa(Juss．)Benth．、

3、石虎Evodiarutaecarpa(Juss．)Benth．var．oficinalis(Dode)Huang或疏毛吴茱萸Evodiarutaecarpa(Juss．)Benth．var．bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果实¨，始载于《神农本草经》，列为中品。具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻之功效，临床常用于治疗厥阴头痛、寒疝腹痛、寒湿脚气、经行腹痛、脘腹胀痛、呕吐吞酸、五更泄泻等。现代药理研究表明，吴茱萸具有舒张血管、降压、强心、止泻、收缩子宫、杀虫、抗炎镇痛、抗菌等活性_2l3J。吴茱萸属植物化学成分共计约240多种，其主要分为生物碱、香豆素、

4、黄酮、萜类、酰胺等。生物碱类成分共计有104种，其中喹诺酮类59种、吲哚类36种、异喹啉类7和其它2种J。从生源关系分析吲哚类36种生物碱中至少有l7种是由色胺衍生的，即此类成分在植物体内是由色胺和非色胺部分反应生成的。因此，在吴茱萸中色胺的存在是很有可能的，可能因为含量小而未被鉴别出来。同时，其它的生物胺类成分也可能存在。生物胺根据其结构可分为3类：脂肪族，包括腐胺、尸胺、精胺、亚精胺等，它们是生物活性细胞必不可少的组成部分，在调节核酸与蛋白质的合成及生物膜稳定性方面起着重要作用；芳香族，包括酪胺、苯乙胺等；杂环胺，包括组胺、色胺等J。也可根据胺基数目分为单胺和多胺两

5、类。单胺主要有酪胺、组胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、色胺等。一定量的单胺类化合物对血管和肌肉有明显的舒张和收缩作用，对精神活动和大脑皮层有重要的调节作用；多胺主要包括精胺和亚精胺，其在生物体的生长过程中能促进DNA、RNA和蛋白质的合成，加速生物体的生长发育。微量生物胺是生物体(包括人体)内的正常活性成分，在生物细胞中具有重要的生理功能。生物胺类成分活性很强，它们的存在也应该对吴茱萸的作用有贡献，因此很有必要搞清楚它们存在的种类和含量。由于大部分生物胺既没有紫外吸收又无荧光，因此目前对生物胺的研究主要是进行衍生化后分析。生物胺的衍生试剂主要有丹磺酰氯(Dansyl—chlor

6、ide)j、4．二甲胺基苯基偶氮苯磺酰(Dabsylchlo—fide)71、2一chlor0ethylnitr0s0urea等J。丹磺酰氯应用最为普遍，生物胺的丹磺酰氯衍生物较为稳定，并同时具有荧光特性和特异的紫外吸收，既可以用荧光检测，也可以用紫外检测J，生物胺与丹磺酰氯的反应式如下：NHR2013~925收稿；2013—11-23接受本文系长江学者和创新团队发展计划(No．IRT1174)和国家自然科学基金(Nos．20872118，30070905)资助E—mail：jlliu@nwu．edu．Cn274分析化学第42卷HPLC是检测生物胺的常用方法，简单有效。

7、为此，本研究以丹磺酰氯为衍生试剂，衍生化色谱法鉴别和测定吴茱萸中的生物胺类成分。本研究在样品的前处理过程中采用液．液萃取步骤对样品进行纯化和富集，适用于测定成分复杂，生物胺含量更低的样品。本方法具有通用性广、灵敏度高、测定结果准确、稳定性好等优点。2实验部分2．1仪器与试剂岛津高效液相色谱仪(LC—IOA)，配备二级管阵列检测器；SHIMADZU．C色谱柱(150mmx4．6mm×51xm)；MilliQBioeel超纯水机(美国Milli—Poreco公司)；移液枪(德国Eppendorf公司)；粉碎机(黄骅市中兴仪器有限公司)；SHA