高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定蜂蜜中5种头孢菌素.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第5期2010年5月ChineseJournalofAnalytic~Chemistry735～739DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．O0735高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定蜂蜜中5种头孢菌素李学民曹彦忠张进杰范春林刘晓茂钱小清(秦皇岛出入境检验检疫局，秦皇岛0660O4)摘要建立了用高效液相色谱一电喷雾串联质谱(LC—MS—MS)测定蜂蜜中5种头孢菌素残留量的方法。蜂蜜样品用磷酸盐缓冲溶液溶解，经OasisHLB固相萃取柱净化。5种头孢菌素在c柱上以乙腈一水为流动相梯度洗脱条件下完成分离，电喷

2、雾电离串联质谱在正离子多反应监测模式下进行测定。添加浓度在2～100g／kg范围时，回收率为84．2％～103．6％；相对标准偏差为3．89％～9．08％。本方法头孢唑啉的定量限为10，头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟的定量限为2．0g／kg。关键词高效液相色谱一电喷雾串联质谱；头孢菌素；蜂蜜1引言头孢菌素是分子中含有头孢烯和头霉烯两类一内酰胺类的半合成抗生素，具有广谱强杀菌、能耐酸、耐青霉素酶及过敏反应发生率比青霉素低的特点，主要对革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌具有杀菌作用¨J。随着头孢菌素化学研究的不断深入，在动物养殖及疾病治疗中广泛应用，导致在动物机体组织中

3、产生头孢菌素残留，对人体健康造成危害。因此，世界各国对部分动物源性产品中头孢菌素残留量均提出了限量要求，如美国FDA规定牛奶中头孢匹林最高残留限量(MRL)为20，牛肉未蒸煮可食组织中头孢匹林最高残留限量为100g／kg；欧盟规定牛奶中头孢菌素最高残留限量为20～100g／kg；日本肯定列表规定牛肉中头孢菌素最高残留限量为10～1000ixg／kg，蜂蜜中头孢菌素最高残留限量还未见报道。牛奶、动物组织中头孢菌素残留量的检测方法有微生物法、酶联免疫法、薄层色谱法、凝胶电泳法J、高效液相色谱法～和液相色谱电喷雾串联质谱法J。本方法参考了文献[8]，研究了蜂蜜中5种头孢菌素的

4、提取和净化效果。以磷酸盐缓冲溶液为提取液，采用固相萃取柱净化，液相色谱．电喷雾串联质谱仪测定。本方法比文献[8]方法操作简单，样品不用乙腈提取和浓缩，回收率高，是一种既能定性又能定量的检测方法，完全适用于蜂蜜中5种头孢菌素残留量的检测。2实验部分2．1仪器与试剂API3000液相色谱。串联四极杆质谱仪(美国应用生物系统公司)，配有电喷雾离子源；1100高效液相色谱仪(Angilent公司)；液体混匀器；玻璃固相萃取装置；真空泵；pH900型pH计(瑞士Precisa公司，测量精度±0．02)。OasisHLBC固相萃取柱(500mg，6mL)：使用前分别用5mL甲醇、1

5、0mL水和5mL磷酸盐缓冲溶液预处理，保持柱体湿润。头孢唑啉(CAS：25953—19—9)、头孢匹林(CAS：24356-60·3)、头孢氨苄(CAS：16549-56—7)、头孢洛宁(CAS：5575—21—3)、头孢喹肟(CAS：118443—89．3)标准物质由Sigma公司提供；甲醇、乙腈为色谱纯；乙酸、NaOH、NaH：PO为优级纯；磷酸盐缓冲溶液(0．15mol／L，pH=8．5)。其它试剂为分析纯。2．2液相色谱与质谱条件液相色谱条件：流动相A为水，含0．1％()甲酸；B为乙腈。梯度洗脱：0～2rain，95％A：2～8min，40％A；8～15min，

6、95％A。流速：200I~L／min。色谱柱：ZORBAXSB—C18(150mm×2．1mm，3．5m)；进样量：20L。2009-06-05收稿；2010-01-05接受E—mml：ciqlixm@163．com736分析化学第38卷质谱条件：离子源为电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测(MRM)；喷雾电压(IS)：5500V；雾化气(NEB)：0．055MPa，气帘气(CUR)：0．079MPa，辅助气(AUIX)：6L／rain；离子源温度40O℃。其它MRM条件见表1。表15种头孢菌素的定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气能量

7、Table1Someparametersofmultiplereactionmonitoringdetectionfor5cephalothins2．3标准工作溶液的配制准确称取每种头孢菌素标准物质，分别用水配制成浓度为1．0g／L的标准储备溶液。取适量头孢菌素标准储备溶液，用空白样品提取液配制成适当浓度的基质混合标准工作溶液。2．4样品处理称取5g蜂蜜样品于150mL三角瓶中，加入25mL磷酸盐缓冲溶液溶解样品，混匀，用5moL／LNaOH溶液调节至pH=8．5。把样品溶液移至下接OasisHLB固相萃取柱的贮液器中，以3mL／min的