高效液相色谱-串联质谱法测定不同畜禽配合饲料中伏马毒素的含量.pdf

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1、第43卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第3期2015年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry4l4～4l8DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．140809高效液相色谱．串联质谱法测定不同畜禽配合饲料中伏马毒素的含量郭文博杨俊花’韩铮陈慧英孙真真赵志辉(上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所，上海201403)(上海海洋大学食品学院，上海201306)摘要为摸清复杂基质中FB。和FB污染的准确水平，本研究建立了高效液相色谱。串联质谱法(LC—MS／MS)测定不同畜禽配合饲料中伏马毒

2、素B。(FB．)和B(FB)的分析方法。样品用乙腈一水(50：50．V／V)提取，MAX强阴离子固相萃取柱富集净化后，以0．1％甲酸和甲醇为流动相，经ThermoC．色谱柱(100mm×2．1mm，5Ixm)分离，采用电喷雾正电离(ESI)多反应模式(MRM)监测，外标法定量。结果表明：不同饲料样品中FB和FB2在1～500g／kg之间线性关系良好，相关系数(R。)均大于0．9990，定量限分别为0．098和0．197us／kg，检出限分别为0．328和0．656kg；低、中、高浓度加标回收率为89．7％95．1％，相对标准偏差(RSD)为3．2％～8．6％

3、。用本方法对市场上采集的106份不同畜禽配合饲料中FB．和F含量进行测定，样品检出率为98．11％。本方法适用于基质复杂的畜禽配合饲料中伏马毒素FB．和FB，的准确、快速定性与定量分析。关键词伏马毒素；阴离子固相萃取柱；液相色谱．串联质谱法；畜禽配合饲料1引言伏马毒素是20世纪80年代末发现，由串珠镰刀菌(Fusariummoniliforme)在一定温度和湿度条件下产生的，以污染玉米及其制品为主的水溶性次级代谢产物_1]，由多氢醇与丙三羧酸组成的双酯类化合物，与人或动物机体内神经鞘氨醇结构极为相似，在神经鞘脂代谢过程中能竞争性地结合神经鞘氨醇N-2酰基转移

4、酶，从而抑制神经鞘氨醇的生物合成、阻碍鞘脂类代谢，引发各种疾病[2]。研究证实，伏马毒素能引起马大脑白质软化症(Equineleuc0encephal0malacia’ELEM)，猪肺水肿综合征(Porcinepulmo．naryedema，PPE)；小鼠实验也表明，伏马毒素对肝脏或肾脏容易造成损伤_3．4]。此外，伏马毒素还具有很强的细胞毒性及免疫毒性，与人类食道癌的发生密切相关J。因此，国际癌症研究中心(InternationalAgencyforResearchonCancer，IARC)将伏马毒素列为2B级致癌物作为人类潜在的致癌物质。伏马毒素主要分

5、布在玉米及玉米制品中，严重威胁畜禽及人类健康_6]。玉米作为畜禽配合饲料的最主要原料，是畜牧业赖以发展的重要基础。因此，伏马毒素含量水平的准确检测对于畜禽配合饲料中伏马毒素的防控和预警具有重要意义。目前，关于饲料中伏马毒素的检测方法主要有柱前衍生高效液相色谱法I8]、气相色谱法]、薄层色谱法[1o]、酶联免疫法ll1]等，这些方法前处理复杂且灵敏度较低，不能满足快速痕量检测的要求。我国国家标准中对于玉米及其制品中伏马毒素的检测主要采用高效液相色谱法和荧光光度法l，选用液相色谱一串联质谱法(LC—MS／MS)作为仲裁法l，也有采用LC．MS／MS测定谷物中的伏

6、马毒素的报道1，]，但这些方法都存在前处理复杂、灵敏度低等问题。此外，畜禽配合饲料由玉米、小麦、麸皮、棉粕、豆粕等多种原料混合而成，基质复杂多样，容易产生基质效应，且不同动物饲料随生理性影响组成各有差异，迫切需要一种能适应不同配合饲料基质、快速有效的检测方法，以适应饲料行业监督检查和畜牧业生产的需求。在前人研究的基础上，本研究采用MAX阴离子固相萃取柱富集净化，改进流动相洗脱程序，缩短分析时间，有效消除基质效应，并用LC．MS／MS进行分析，提高检测灵敏度，可用于大批量畜禽配合饲料中FB和FB，检测分析，为不同畜禽配合饲料中伏马毒素的2014-09-09收稿

7、：2015-01-05接受本文系上海市农委科技兴农重点攻关项目沪农科攻字(2013)第38号，沪农科攻字(2014)第3-2号项目资助E—mail：zhao9912@hotmail．corn第3期郭文博等：高效液相色谱一串联质谱法测定不同畜禽配合饲料中伏马毒素的含量415准确定量分析提供技术支撑。2实验部分2．1仪器与试剂液相色谱．串联质谱：TSQQuant配Surveyor液相操作系统(美国ThermoFisherscientific公司)；MAX柱(200mg，6mL，美国Waters公司)。HeraeusMuhifugeX3高速离心机(ThermoFi

8、sherScientific中国有限公司)。甲醇、乙