割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化.pdf

《割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、南方农业学报JOURNALOFSOUTHERNAGRICULTURE2013，44(4)：552．-557][SSN2095—1191：CODENNNXAABhttO：／／,Ⅲw．nfnyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095-1191．2013．4．552割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化刘许辉1，段维兴2，刘新龙3，杨海霞1，高轶静2，罗霆2，宋焕忠2，张革民2+(1广西大学农学院，南宁530005，2广西农业科学院甘蔗研究所，南宁530007，3云南省农业科学院甘蔗研究所云南开远661600)摘要：【目的】建立和优化割手密AFLP分子

2、标记技术体系，为割手密遗传多样性分析、遗传图谱构建提供技术支持。【方法】以广西割手密GXS87-．16、GXS85．30、GXS79．9、GXS96、GXSll2、GXS212为材料，利用改良SDS法提取DNA，并用EcoRI和MseI酶切，连接接头后，采用正交试验设计对影响预扩增反应和选择性扩增反应的主要成分如Mf+、模板DNA、引物、dNTP、Taft聚合酶浓度进行优化。【结果】样品DNA用限制性内切酶EcoRI和MseI各3U于PCR'仪过夜可完全酶切。经正交设计优化，较佳的预扩增体系包含0．4斗LdNTPs(20mmol／mL)，1．6IxLMf+(25m

3、mol／mL)，2．0)xLEcoRI-P(5pmol／mL)，2．0IxLMseI．P(5pmol／mL)，1U而q酶(1U／斗L)，DNA模板稀释10倍；选择性扩增体系包含0．4斗LdNTPs(20mmol／mL)，0．8斗LM矿(25mmol／mL)，1．0斗LEcoRI．AAG(6pmol／mL)，1．0IxLMseI．CAG(6pmol／mL)，3U翰q酶(1U／IxL)，DNA模板稀释20倍。以对优化反应体系扩增获得的PCR)仁物用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染后，可获得清晰的多态性指纹图谱。【结论】建立的割手密AFLP分子标记技术体系具有扩增条带清

4、晰、多态性丰富的特点，可为构建割手密高密度遗传图谱提供技术支持。关键词：割手密；AFLP；改良SDS；法；正交设计；优化中图分类号：$566．1文献标志码：A文章编号：2095—1191(2013)04-．-0552—06EstablishmentandoptimizationofAFLPmolecularmarkertechnologysystemfor&spontanuemL．LIUXu一-huil，DUANWei—xin"2，LIUXin—lon93，YANGHai-xiall，GAOYi-jin92，LUOTin92，SONGHuan-zhon92，ZHA

5、NGGe-miw2+(1AgriculturalCollege，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；2SugarcaneResearchInstitute，GuangxiAcademyofAgnculturalSciences，Nanning530007，China；3SugarcaneResearchInstitute，YunnanAcademyofAgriculturalSciences，Kaiyuan，Yunnan661600，China)Abstract：【Objective】TheAFLPmolecu】Jarmar

6、kertechnologysystemforSac,,ch。qB'llmspontaneumLwasestablishedandoptimizedtoprovidesupportfortheanalysisofgeneticdiversityandgeneticmapconstruction．【Method】TheDNAofSalccharumspontaneumLmateri{alsviz．．GXS85一-30，GXS87—16．GXS79一-9，GXS96，GXSll2andGXS212collectedfromGuangxiwereextractedbymo

7、diifiedSDSmethod．andcompletelydigestedbyenzymeEcoRIandMseI．ThedigestedfragmentswerelegatedbytheEcoRIandMseIadaptors．Then．onthebasisoftheorthogonalexperimentaldesign．thein—flueneingcomponentsonpreamplifficationandselectiveamplificationreactions，namelyM92+，DNAtemplate，primer，dNTP，andTaq

8、DNIAp