生理学实验二 红细胞比容、血红蛋白及渗透脆性测定.ppt

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1、实验二红细胞比容测定红细胞脆性的测定血红蛋白含量测定一、红细胞比容测定目的掌握红细胞比容的测定方法。原理将定量的抗凝血灌注于带刻度玻璃管中，定时、定速离心，根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在全血中的容积百分比，即为红细胞比容（压积）。方法与步骤温氏分血管比容法用带有长注针头的注射器将抗凝血注入分血管，使血液精确到10cm刻度处。离心：将分血管以3000r/min离心30min，取出分血管，读取红细胞柱的高度，该读数的10倍即为红细胞比容（容积百分比）。[注意事项]注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。温氏分血管内

2、壁要充分干燥。血液进入毛细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有气泡。二、红细胞脆性的测定目的学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。原理正常红细悬浮于等渗的血浆中，若置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀甚至破裂，释放血红蛋白，称为溶血。红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。开始出现溶血现象的低渗溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血时的低渗溶液浓度，则为该血液红细胞的最大抵抗力。方法与步骤1、溶液配制：取10个小试管，配制出10种

3、不同浓度的氯化钠低渗溶液（0.25%，0.3%，0.35%，0.4%，0.45%，0.5%，0.55%，0.6%，0.65%，0.9%）。2、加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加一滴，轻轻摇匀，静置1～2h。3、观察结果：根据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞脆性。①未发生溶血的试管：液体下层为大量红细胞沉淀，上层为无色透明，表明无红细胞破裂。②部分红细胞溶血的试管：液体下层为红细胞沉淀，上层出现透明淡红（淡红棕）色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。③红细胞全部溶血的试管：液体完全变成透明红色，管底

4、无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。1%NaCl稀释成不同浓度的低渗溶液试管号123456789101%NaCl(ml)2.701.951.801.651.501.351.201.050.900.75蒸馏水(ml)0.301.051.201.351.501.651.801.952.102.25NaCl浓度(ml)0.90.650.600.550.500.450.400.350.300.25[注意事项]小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，只加一滴。混匀时，轻轻倾倒1～2次，减少机械震动，避免人为溶血。配制不同浓

5、度的NaCl溶液时应力求准确、无误。三、血红蛋白含量的测定目的掌握用比色法测定动物的血红蛋白的含量。原理血红蛋白的颜色常与氧的结合量有关。当用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋白（或高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准色进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。方法与步骤沙里氏血红蛋白计测定沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。沙里血红蛋白计主要由标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。比色管两

6、侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。具体测定方法如下：①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或10%处)。②用微量采血管吸血至20μl，仔细揩去吸管外的血液。③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合

7、，静置10min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100ml血中所含的血红蛋白的克数。【注意事项】血液要准确吸取20μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。