食源性致病微生物快速检测技术研究进展.pdf

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1、监测分析·MONITORING食源性致病微生物快速检测技术研究进展邵劲松1，高芹1，洪青2（1援农业部农产品质量安全监督检验测试中心（南京），江苏南京210036；2援南京农业大学生命科学学院，江苏南京210095）摘要：对国内外食源性致病菌的快速检测技术研究进展进行了简要综述，包括改进微生物培养法、酶联免疫（ELISA）法、PCR技术、基因芯片技术、直接计数法、自动化仪器分析技术等。关键词：食源性致病菌；快速检测；研究进展文章编号：1005-4944（2010）06-0096-04近年来，随着人们生活水平的不断提高，食品安1.2快速纸片法全越来越受到重视和关注。经济贸易全球化又使得

2、食测试片为预先制备好的培养基系统和一种冷水源性疾病成为世界性公共卫生问题，无论是发展中国可溶性的凝胶剂，以及由于检测项目不同而不同的指[1]家还是发达国家都不可避免。诺罗是一种病毒，人们示剂。它由上下2层薄膜组成，下层的聚乙烯薄膜上通常因为吃了牡蛎之类的贝类感染，并引发急性肠胃印有网格并且覆盖有细菌生长的培养基，上层是聚丙炎和食物中毒。自2004年开始，诺罗病毒连续2年在烯薄膜。使用时接种1mL待测样品的稀释液在下层日本流行，2006年更是横扫了日本除冲绳岛和青森外的培养基上，盖上上层聚丙烯薄膜即可完成，通常只[2]的所有县，患者人数已近百万。因此，加强对食源性需24耀48h即可得出

3、结果。纸片法已成功用于大肠杆致病微生物的监测，发展快速灵敏的检验检测技术，菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和霉菌的检测，由于其对预防和控制疾病的发生和传播具有重大意义。本文应用方便快捷，与传统的检测方法之间的相关性非常对近些年来国内外学者在致病微生物的快速检测技好，该检测方法发展迅速，已被广泛应用于各个领[4]术上的研究进展进行综述，以促进该相关技术在我国域。的发展和应用。1.3特异性显色培养基法1改进微生物培养法[3]是通过特异性显色反应来进行微生物检测和鉴利用传统方法检测和鉴定微生物，步骤烦琐，所定的一种方法。其基本原理是根据微生物本身具有复需时间长。改进微生物培养法主要通过预处理缩

4、短增杂多样的酶系统，在分离培养基中加入人工合成的无菌时间（或者不需要预处理），加入抑菌剂、指示剂、荧色底物，在微生物细胞中存在的特异性酶作用下游离光物质等，简化检验步骤，从而实现快速检测的目的。出产色基团并产生荧光或显示出特定颜色，通过对产较成熟的方法有疏水网膜法（HGMF）、快速纸片法、显生的荧光和菌落直接生成的颜色来对该菌株进行鉴[5]色培养基法等。定，其反应灵敏快速，特异性强。目前，已有多种包括1.1疏水网膜法（HGMF）念珠菌属、肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等显色将被检测样品用疏水网膜过滤，微生物被捕获在培养基面世。疏水网膜的小格中，在接种后的疏水网膜上倾入适当1.4免疫

5、磁性微球法的琼脂，经一定时间培养后即可计数。可用于沙门氏免疫磁性分离方法，是将特异性抗体耦联在磁性菌、大肠杆菌、霉菌、酵母菌等的检测。颗粒表面，与样品中被检验致病微生物发生特异性结96农业环境与发展2010年第6期监测分析·MONITORING合，载有致病微生物的磁性颗粒在外加磁场的作用如果加入内标，作出标准曲线，就能实现定量检测。下，向磁极方向聚集，使致病微生物不但得到分离，也4基因芯片（DNAchip）鉴定技术[6]得到浓缩。20世纪90年代发展起来的基因芯片技术是一种2酶联免疫吸附法由分子生物学、微电子学、物理学、化学、计算机科学酶联免疫吸附（Enzyme-linkedimmu

6、nosorbentas原等多学科交叉融合而成的高新技术，它是采用原位合say，简称ELISA），是一种固相酶免疫分析方法，它是成或显微点样技术将大量DNA探针有序地固化于支把抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用持物表面，然后与标记的样品杂交，通过杂交信号的有机结合起来的一种检测技术，它既可以测抗原，也检测分析，获得样品的基因序列、基因表达信息等遗可以测抗体。用固相载体吸附抗体（抗原），加入待测传信息。抗原（抗体），然后再加入相应的酶标记抗体（抗原）进利用基因芯片技术可以大规模、平行化、高通量行抗原抗体的特异免疫反应，生成抗体（抗原）—待测对功能基因进行分型与鉴定，高密度基因芯片

7、可同时抗原（抗体）—酶标记抗体（抗原）的复合物，最后与该对成千上万个样品进行检测与分析，极大地加快了检[11]酶的底物生成有色产物。根据吸光度值计算出待测产测进程，提高了检测速度。物的量，既能定性，又能定量。由于ELISA特异性强，我国对基因芯片的研究也非常重视，国内已有顾[12]灵敏度高，检测结果迅速准确，重现性好，已广泛应用鸣等人成功研制成常见食源性致病菌基因芯片，该[7]于各种分析领域特别是生物领域。鉴定系统能同时并行检测10种常见致病菌；北京出3P