化学发光磁微粒免疫分析法定量检测HBsAg.pdf

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1、DOI:10.13602/j.cnki.jcls.2013.11.016·836·临床检验杂志2013年11月第31卷第11期ChinJClinLabSci，Nov．2013，Vol．31，No．11文章编号:1001-764X(2013)11-836-02·临床检验技术研究·化学发光磁微粒免疫分析法定量检测HBsAg1，2333313周齐洋，金晶，江波，先小龙，颜彬，吕华，苏恩本(1．东南大学生物科学与医学工程学院，南京210096;2．江苏省医疗器械检验所，南京210022;3．南京基蛋生物科技有限公司，南京211505)摘要:目的建立定量检测HBsAg的化学发光磁微粒免疫分析

2、法。方法2株抗HBs单克隆抗体分别标记吖啶衍生物和生物素化，生物素化的抗HBs通过链霉亲合素包被到磁珠上形成致敏磁珠。将待测标本加入吖啶标记的抗HBs(吖啶-抗HBs)与致敏磁珠的体系中，形成致敏磁珠-HBsAg-吖啶标记抗HBs夹心复合物，磁性分离清洗。重复加样1次，磁性捕获分离后激发吖啶衍生物发光，用化学发光分析仪检测光强度，计算标本中HBsAg的浓度。结果该法线性方程为Y=0．919X+4．28，相2关系数r为0．99，线性范围为0．0197～250．00IU/mL。灵敏度可达0．0207IU/mL。0．1、3．2和40IU/mL样本各重复测定10次的变异系数(CV)值分别为

3、2．70%、4．40%和2．70%。与Abbott公司HBsAg定量检测试剂盒(化学发光微粒子免疫检测2法)检测40份标本浓度的线性相关方程为Y=0．9808X+0．2099，r=0．99，两法结果差异无统计学意义(t=1．519，P＞0．05)。以10、50、100和200IU/mL作为检定点，各检定点相对偏差分别为0．18%、1．50%、1．71%和1．81%。结论建立的方法有较高的灵敏度、合适的线性，同时具备良好的可重复性，与Abbott公司试剂盒检测结果高度相关。关键词:磁珠化学发光免疫分析法;灵敏度;HBsAg中图分类号:Ｒ446．6文献标志码:A［1］HBsAg阳性为H

4、BV感染的标志。化学发光微1．3．1生物素化GP3SAB制备按照物质的量粒子免疫分析(chemiluminescentmicroparticleimmu-比1∶100的比例将生物素琥珀酰亚胺酯溶液(10noassay，CMIA)法因其检测速度快以及可以全自动g/L)迅速加至GP3SAB单抗中，37℃温育2h后取化备受青睐，近年来逐渐取代ELISA法而成为大型出，置于4℃用PBS(20mmol/L，pH7．5)透析，每4医院检验科常备的检测HBsAg的手段。Abbott公h更换1次透析液，更换1～2次。透析结束后加入司CMIA定量检测HBsAg试剂盒的参考值为＜储存添加液和甘油后置－

5、20℃保存。0．05IU/mL，检测的灵敏度很高，但尚无国产同类1．3．2吖啶衍生物标记GP7SAB按物质的量比试剂。为此，本研究建立了一种可大幅度提高1∶70的比例将吖啶衍生物(4g/L)迅速加入HBsAg检测灵敏度的化学发光磁微粒分析方法。GP7SAB单抗中，37℃温育2h后取出，用20mmol/LPBS(pH7．5)置于4℃透析，每次使用4L1材料与方法透析液，每6h更换1次透析液，使用MagiCL68001．1标本来源收集2013年1～6月南京市第二全自动磁微粒化学发光免疫分析仪测定透析液的相人民医院检测HBsAg的血清标本40份。以Abbott对发光强度(ＲLU)，直至透

6、析液测定ＲLU低于公司HBsAg定量检测试剂盒(CMIA法)检测HBsAg1000，将吖啶衍生物标记GP7SAB加入甘油保存。［2］浓度，其中25份阴性(＜0．05IU/mL)，15份阳性1．3．3磁珠包被链霉亲合素取1mL5mg/mL(＞0．05IU/mL)。的氨基磁性微珠悬液于离心管中，磁性分离，去除上1．2仪器与试剂MagiCL6800全自动磁微粒化清;用6mL磁性微珠包被液(20mmol/LPBS，pH学发光免疫分析仪、小鼠抗HBs单克隆抗体7．5)将磁性微珠重悬浮;加入25%戊二醛2mL于GP3SAB、GP7SAB(南京基蛋公司)，酪蛋白(上海拜悬液中，活化3h;用磁性微

7、珠包被液洗涤活化磁性力公司)，氨基磁性微珠(天津倍思乐色谱技术开发微珠3次，磁性分离弃上清;将清洗好的磁性微珠悬中心)，吖啶衍生物(上海迈拓崴公司)，生物素琥珀浮于磁性微珠包被液中，加入5mg/mL的链霉亲合酰亚胺酯、链霉亲合素(美国ThermoFisher公司)，素0．5mL后，反应6h;磁性分离，去除上清，将已包Tween-20、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠(南京化被磁珠悬浮于包被液中，再加入2g/LBSA，混匀，学试剂公司)，Proclin300防腐剂(美国S