课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (2).pptx

《课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (2).pptx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题二尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥尿素不能直接被农作物吸收，只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用。土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶。CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3尿素颗粒尿素分子的立体结构脲酶本节课题学习目标1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌2.统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一、研究思路（一）筛选菌株1.实例：PCR技术：一种在体外将少量DNA大量复制的技术。此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。提出的问题—如何寻找耐高温的DNA聚合酶？解决问题的思路—寻找耐高温环境。原因：高温条

2、件淘汰了绝大多数微生物。获得启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。2.实验室微生物的筛选原理人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。本课题使用的培养基KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4.7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存。3.选择培养基问题1：该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？问题2：此配方能否筛选

3、出产生脲酶的细菌？为什么？（1）概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。（2）例子：加入青霉素的培养基--细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长。不加含碳有机物的无碳培养基—分离自养型微生物。【典型例题】用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是()A.未接种的选择培养基B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C.接种了的选择培养基D.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D【典型例题】选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的

4、微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为()A.伊红美蓝培养基、含青霉素培养基B.含青霉素培养基、含氨的无机培养基C.含氨的无机培养基、含青霉素培养基D.含青霉素培养基、伊红美蓝培养基B1、显微镜直接计数：原理：利用血球计数板(血细胞计数板)，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。不能区分死菌与活菌；个体小的细菌在显微镜下难以观察；缺点：二.统计菌落数目做法：每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。2．活菌计数法（稀释涂布平板法）（1）操作

5、方法：稀释涂布平板→统计菌落数（2）原理：在稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。即1个菌落→1个活菌。（3）统计方法：①选30∼300个菌落的平板统计；②每个稀释度取3个平板，取其平均值；（4）结果：统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.

6、1mL）（）A.2.34×108B.2.34×109C.234　　D.23.4B【解析】稀释倍数为106，0.1mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。计算公式：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×MC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。【例2】两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三

7、个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）。乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值。【方法点拨】稀释涂布平板法计算注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好