双毁髓技术及剑突取材染色观察.doc

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1、双毁髓技术及剑突取材染色观察实验Fl的:1）了解“双毁髓”技术的意义2）对蟾赊剑突软骨进行观察3）认识辨析蟾赊的泄殖系统•、实验原理1）双毁髓技术的生理意义双毁髓技术是通过破坏蟾赊的脑髓和脊髓从而达到麻醉蟾赊的n的的一种生物技术方法。由于蟾赊属低等动物，因而在其在神经系统被破坏的条件下循环系统依然正常工作。这种操作可以最大限度的减轻实验给蟾赊带来的疼痛感同时保证蟾赊的生命体征完整，使机体更接近正常条件，且排除了神经系统对实验结果的影响，减少了蟾赊的反射动作与疼痛感，降低了实验操作的难度的同时也将对蟾赊的影响减到了最小，并使实验者在解剖过程小可以更清晰地观察到活体蟾赊体内器官的形态。如果对其进

2、行单纯的杀死，会导致蟾赊体内器官的衰竭、肌肉的僵硬，给实验观察带来误差,不便于操作与观察。但是否进行对神经系统的破坏要根据具体实验决定，如需神经屮枢介入的实验则不能使用双毁髓技术麻醉蟾赊。同时，双毁髓技术只适用于低等动物的麻醉处理，高等动物需通过药物麻醉。2）胸骨软骨直接观察的原因和方法蟾赊只有一块胸骨（蛙具有多块），其下半部分为软骨组织，而软骨组织的边缘为单层细胞，可以直接染色作为切片观察。它与软骨陷'窝内的软骨细胞是同源细胞。通过观察软骨边缘的单层细胞可以观察到软骨细胞的有丝分裂和减数分裂过程。具体方法是剪下蟾赊胸骨下部边缘很薄的部分，平铺于载玻片上，用亚甲基蓝或酸化的苏木精染剂染色后直

3、接置于显微镜下观察边缘的单层细胞。由于亚甲基蓝可以和核酸进行特异性结合，故能将细胞核染为蓝色。苏木精染液为碱性，主要是细胞核内的染色质着色，半染色条件为酸性吋（pH为6.0左右），细胞内的酸性物质如染色质、透明软骨基质就易被碱性染料染色。3）蟾赊的泄殖系统泌尿器官：1）肾脏：1对红褐色长而扁平的器官，位于体腔后部，紧贴背壁脊柱的两侧。肾的腺缘有1条橙黄色的肾上腺，为内分泌腺体。2）输尿管：由两肾的外援近后端发出的1对壁很薄的细管，它向后伸延，左右输尿管末端合并成一总管后通入泄殖腔背壁。3）膀胱：位于体腔后端腹而屮央，连附于泄殖腔腹壁的1个两叶状薄壁囊。泄殖腔：为粪、尿和生殖细胞共同排出的通道

4、，以单一的泄殖腔孔开口于体外。生殖器官雄性：1）精巢：1对，位于肾脏腹面内侧，近白色，长柱形，其前部呈黄色，后部稍带黑色，其大小随个体和季节的不同而有差异。2）输精小管和输精管：由精巢内侧发出的许多细管即输精小管，它们通入肾脏前端。输尿管兼输精。在肾脏外侧的一对弯曲的管子，为雄性退化的米勒氏管。3）脂肪体：位于精巢前端的黄色指状体，其体积大小在不同季节里变化很大。雄蟾赊精巢前方，有1对扁圆形的毕氏器，为退化的卵巢。在肾脏外侧各有1条细长管，为退化的输卵管，其前端渐细而封闭，后端左右合一，开口于泄殖腔。雌性：剧駅口子宫」卜心號华特氏4事丸聽的米运一年特氏为■8-3«««性矗殖豪统1）卵巢：1对

5、，位于肾脏前端腹面，形状大小因季节不同而变化很大。在生殖季节极度膨大，内有大量黑色卵，未成熟时淡黄色。2）输卵管：卵巢外侧的长血迂曲的管子为输卵管，或称米勒氏管，为1对长而迂曲的管子，乳白色，位于输尿管外侧。以喇叭状开口于体腔；后端在接近泄殖腔处膨大成囊状，称为“子宫”。左右“子宫”合并后，通入泄殖腔。3）脂肪体：1对，与雄性的相似，黄色，指状，临近冬眠季节时体积很大。雌蟾赊的卵巢和脂肪体Z间有橙色球形的毕氏器，为退化的精巢。三、实验器材实验动物：活蟾赊器材：解剖盘大头针骨剪直尖解剖剪曲尖解剖剪银子眼科锡解剖针四、方法与步骤将蟾赊前肢夹于左手屮指与无名指Z间，后置夹于无名指与小指乞间，食指按

6、住蟾赊的头部，押指按住尾部。食指下压头部，使其头部向前俯下，右手持解剖针从头部屮央屮线向后滑动，接触到一软凹陷处即为枕骨大孔，将解剖针从枕骨大孔垂直刺入约1毫米，转向丄刺入颅腔，至触及硬质颅骨，然后左右晃动解剖针，破坏脑组织，然后将解剖针退回枕骨大孔，转向下旋转刺入椎管，破坏脊髓，至蟾赊四肢僵直后放松下垂时，表明双毁髓完成，可将解剖针拔出。使蟾赊腹而向上，使用大头针将蟾赊四肢固定于蜡盘上。用银子提起蟾赊腹部一小块皮肤，并用解剖剪剪一小口，然后沿屮央向JL剪开，露出腹直肌与胸骨。剪下胸骨下沿最薄的部分平铺于载玻片上，滴加亚甲基蓝染色，染色完全后用吸水纸吸去多余的染液，将载玻片直接置于显微镜下观

7、察软骨边缘单层细胞。避开腹静脉，沿腹屮线一侧剪开腹直肌，使体腔内脏器暴露，找出泄殖系统的相关器官，取出并排列。五、实验结果软骨细胞染色照片蟾赊整体生殖系统六、实验结论1）对于不需要神经屮枢参与的蟾赊活体解剖实验，可采用双毁髓法麻醉。2）蟾赊胸骨（剑突）下部软骨边缘有单层细胞，可直接作为切片染色观察。染色剂可选用亚甲基蓝或酸化的苏木精染剂。3）雄性蟾赊的泄殖系统包括肾脏，输尿管，膀胱，脂肪体，毕氏器，精巢，输精