课题1 菊花的组织培养.doc

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1、课题1菊花的组织培养学习目标1.说明植物组织培养的基木原理。2.学习植物组织培养的基木技术。3.进行菊花或其他植物的组织培养。学习重点与难点重点：1.植物组织培养的相关概念和过程2.影响植物组织培养的因索3.植物组织培养过程屮使用的无菌技术。难点：1.影响植物组织培养的因素。2.植物组织培养过程屮使用的无菌技术。自主探究%1.植物组织培养的相关概念和基木过稈1.植物组织培养的相关概念（1）细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在、和上都会出现稳定性的差异,形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基因的结果。（2）细胞的全能性：的植物细胞仍然具有发冇成为的潜能。细胞全能性迅

2、组织培养的基木原理。（3）愈伤组织：由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种的呈无定形状态的0（4）脱分化：由的植物组织或细胞产生的过程，称为脱分化，又叫去分化。（5）再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成,这个过程叫做再分化。（6）外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。2.植物组织培养的基木过稈人为使用植物激素控制移植——试管苗完整的植物体%1.影响植物组织培养的因索1.内部因素：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。同种植物材料，,等也会影响实验结果。菊花的组织培养，

3、一般选择的茎上部新萌生的侧枝。2.外部因素：（I）营养条件常用的是培养基，其主要成分包括：,如;,女（1;等。（2）植物激素植物激素屮和是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因索。、以及等，都会影响实验结果。（3）环境因素、、等条件也能影响植物组织培养。菊花组织培养,一般PH控制在:温度控制在；每天用口光灯照射小时。【思考】（1）MS培养基屮，各种营养成分各有什么作用？与微生物培养基的配方相比，有什么不同？⑵生长素使用的先后顺序、用量比例不同分别会造成哪些影响？三、实验操作过程1、制备MS固体培养基实验室一般使用4°C保存的配制好的培养基母液来制备（1）配制各种母液。配制母

4、液时，大量元素浓缩,微量元素浓缩。常温保存。激素类、维生素类以及用最比较小的冇机物可以按照lmg/ml的质最浓度单独配制母液。川母液配制培养基时，需要根据备种母液的浓缩倍数，计算用量。（2）配制培养基。配制1LMS培养基时，将称量好的琼脂加入800mL蒸锢水，加热熔化，然品加入蔗糖30g,依次加入母液，定容至lOOOmLo,然后分装到锥形瓶屮，每瓶分装o（3）灭菌。高压蒸汽灭菌2、外植体消毒选取菊花茎段时，要取O无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑:另一方面还要考虑植物材料的0不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要

5、区别对待。一般情况下，细菌污染可能是由接种人员造成的，真菌污染可能是灭菌不当。过程：流水冲洗一软刷刷洗一流水冲洗①过程流水冲洗一软刷刷洗一流水冲洗一无菌吸水纸吸干外植体表面一体积分数为的酒精屮摇动2〜3次，持续一无菌水清洗〜无菌吸水纸吸干外植体表面一质量分数为0」％的溶液中l~2min-*无菌水中至少清洗3次3、接种接种前，川体积分数70%的酒精将丁作台擦拭，然后点燃酒精灯。所有的接种操作必须在酒精灯旁进行，并且每次使用器械后，都要用火焰灼烧灭菌4、培养接种后的锥形瓶最好放在中培养。培养期间定期消毒，温度控制在18-22V,并且每天用口光灯光照12h5、移栽6、栽培附：一般

6、来说，容易进行的植物，也容易进行组织培养。【思考】：（1）实验操作过稈中为什么要进行一系列的消毒、灭菌，实验中是如何做到无菌操作的？（2）你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？【知识补充】1.无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键植物组织培养不同于抨插、分根、叶插等常规无性繁殖。由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，所以对培养条件的要求较高，对无菌操作的要求非常严格。无菌技术包括培养基消毒火菌和植物材料（外植体）的消毒火菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，共至不同器官要区别对待。

7、2.妥善处理被污染的培养物即使对于有经验的操作人员，操作后岀现培养物被污染的情况也常有。一般情况下，细菌污染可能是由接种人员造成的，如未戴口罩，接种时说话，或手及器械消毒不严等。真菌污染可能是植物材料灭菌不当。3.你能说出各种营养物质的作川吗？同专题2屮微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？微量元索和大量元索提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压;甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响麻所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养