木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基基因全长克隆.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgrieuhure2014，45(7)：1147—1153ISSN2095—1191；CODENNNXAABDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．7．1147木薯淀粉合成关键酶AGPased、亚基基因全长克隆郭雅静1‘2，罗兴录1‘扩，陈会鲜1(1广西大学农学院，南宁530005；2广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室，南宁5300073亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁530005)摘要：【目的】克隆木薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(A

2、GPase)小亚基基因cDNA全长序列，为木薯高淀粉品种的分子育种提供依据。【方法】根据木薯AGPase／j、亚基基因已知片段设计特异性引物，以木薯根、茎、叶为材料，利用PcR及RAcE克隆木薯AGPase／]、亚基基因cDNA全长序列。运用生物信息学方法对其核苷酸序列和推导氨基酸的理化性质、蛋白质三级结构进行系统分析。【结果】克隆获得木薯淀粉合成关键酶AGPase／j、亚基cDNA全长1566bp，其中包括1566bp的完整ORF，编码一个含521个氨基酸的多肽。其理论蛋白质分子量57．01kDa，等电点6．1，呈酸

3、生。多重

4、序列比较分析结果显示，木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基核苷酸序列与蓖麻、麻风树和杨树相应序列的相似性分别为87％、87％和86％。结合系统进化树分析结果推测，木薯淀粉合成关键酶AGPase／j、亚基在不同物种及进化过程中具有高度的保守性。蛋白三级结构分析结果表明，木薯AGPase／j、亚基蛋白具有15个仪一螺旋、24个p一折叠和多个转角。【结论】木薯AGPase小亚基基因cDNA全长序列与蓖麻、麻风树和杨树等具有较高的同源性。关键词：木薯；腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)；基因克隆；序列分析；基因全长中图分类号：$

5、533文献标志码：A文章编号：2095—1191(2014)07—1147—07Cloningandores5"analysisofsmallsubunitloningantlexpresslonanalysissmallSUDUnItgeneI“nU一儿一lengthincassavaAGPaseGUOYa—jing1’2LUOXing—lul，妒．CHENHui-xianl(1AgricuhuralCollege，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；2GuangxiCropsGenet

6、ichnprovementandBiotechnologyLab，Nanning530007，China；3StateKeyLaboratoryforConsen_ationandUtilizationofSubtropicalAgro—bioresources，Nanning530005，China)Abstract：【Objective】ThesmallsubunitgenecDNAsequenceofcassavaAGPasewasclonedinordertoprovidereferencesforgenetictran

7、stbrotationofcassavastarchandmolecularbreedingofhigh—starchvarieties．【Method]AccordingtoknownsmallsubunitgenesegmentsofcassavaAGPase，thespecificprimerswasdesigned．Byusingcassavarootsandleavesasmaterials．cDNAfull—lengthsequenceofcassavaAGPasesnlallsubunitgenewascloned

8、usingPCRandRACEtechnologies．Thephysicalandchemicalproperlies，proteintertiarystructureofnucleotidesequenceandanlinoacidwereanalyzedusingbiointbmmticsmethod．【Result】TheclonedcDNAfull—lengthinsmallsubunitofcas—savaAGPasewas1566bp，whichincluded1566bpofcompleteORF，andenco

9、dedapolypeptidecontaining520anlinoacids．Thetheoryproteinmolecularweightwas57．01kDa，isoelectricpointwas6．1，anditshowedacidic．Muhiple