滇桂艾纳香水溶性多糖BRP-B的分离纯化及止血活性.pdf

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1、第28卷第1期应用化学Vo1．28Iss．12011年1月CHINESEJOURNALOFAPPUEDCHEMISTRYJan．2011滇桂艾纳香水溶性多糖BRPB的分离纯化及止血活性廖敏富“林翠梧黄丽。许子竞覃飒飒李爱媛(“广西大学化学化工学院南宁530004；广西中医学院南宁)摘要用蒸馏水溶解滇桂艾纳香浸膏，从中提取多糖，通过膜分离、三氯乙酸法脱蛋白、二乙氨基乙基(DEAE)纤维素脱色、SephadexG10、SephadexG50凝胶柱色谱纯化，获得滇桂艾纳香水溶性多糖(BRP—B)。由凝胶渗透色谱(HPGPC)确定BRP—B为相对分子质量分布均一的多糖，其数均分子量和质均分子量分别为

2、2654和2716Da。以血浆复钙时间(PRT)为指标，研究BRP—B的凝血活性，结果显示BRP—B质量浓度为6．25×10I2g／L时，凝血时问为248．52s，凝血时间抑制率达22．42％。小白鼠离体子宫实验结果显示，BRP．B质量浓度为1．67×10～、1．97×10及2．85×10g／L时能明显增加子宫平滑肌的收缩频率。关键词滇桂艾纳香，多糖，分离，纯化，止血活性中罔分类号：0629．1文献标识码：A文章编号：1000-0518(2011)01-0083-05DOI：10．3724／SP．J．1095．2011．00124滇桂艾纳香为菊科艾纳香属植物(Blumeariparia(BI

3、．)DC．)，具有养肝活血、收敛止血、活血不伤血、止血不留瘀等功效，可用于各种出血症；民间常以水煎汤剂服用，用于治疗妇女功能性子宫出血、产后出血等症有独特的疗效⋯。国内对该植物化学成分及药学的初步研究发现该植物含有原儿茶酸、绿原酸、豆甾醇、J8一谷甾醇、槲皮素-3]、咖啡酸、小麦黄素、芹菜素、木犀草素等成分l4J。但有关滇桂艾纳香具体化学成分尤其是多糖的止血作用药理活性研究报道尚未见。考虑到民间常服用的滇桂艾纳香水煎汤剂其有效成分均是水溶性的，又鉴于小分子量的多糖具有表观黏度低、水溶性好、生物活性多样、易于透过机体组织屏障直达细胞内部发挥药效及利于结构与功能机制的研究等特点。]，本文报道了滇

4、桂艾纳香中相对分子质量在10～10范围内的水溶性多糖成分的分离、纯化、鉴定及其止血活性的初步研究。1实验部分1．1试剂和仪器滇桂艾纳香水提浓缩浸膏(广西桂西制药厂)；冷冻血浆，由南宁市中心血站提供健康人血浆，～25℃保存；云南白药、缩宫素、乐氏液及小白鼠离体子宫标本等由广西中医学院提供；二乙氨基乙基(DEAE)纤维素(上海试剂二厂)，SephadexG10、SephadexG50凝胶柱(法玛西亚公司)，透析袋(上海绿鸟科技公司)，pH=7．1的PBS缓冲液(NaC1：0．13mmol／L，KC1：2．7mmol／L，Na，HPO：12mmol／L，KHPO：1．5mmol／L，棕色瓶保存)；

5、其它试剂均为国产分析纯。多功能陶瓷膜(合肥世杰膜工程有限责任公司)，多功能有机膜(合肥世杰膜工程有限责任公司)。GPC仪检测器为Agilent1100型示差折光检测器，色谱柱为TSKGELG3000SWTOSOH串联TSKGELG4000PWTOSOH，预柱：TSKGELSWTOSOHAAS；EasypureLF超纯水仪，BL-420生物信息处理系统，HW-400S型张力传感器。1．2滇桂艾纳香水溶性多糖(BRP—B)的分离纯化参照文献[8]方法，将5kg滇桂艾纳香水提浓缩浸膏，加l5倍量的蒸馏水溶解过滤，将滤液依次过截留相对分子质量为10的陶瓷膜和截留相对分子质量分别为10和10。的有机复

6、合膜进行初步分离，2010-03433收稿，2010-04-21修回国家自然科学基金(20662001，20962002)资助项目，2007年国家大学生创新实验项目(071059314)通讯联系人：林翠梧，教授；Tel：0771—3275878；E—mail：lincuiwu@163．corn；研究方向：中草药化学成分和天然产物的研究与开发应用化学第28卷将相对分子质量在10～10的分离液减压浓缩至500mL。在冰浴冷却下，用质量分数为5％的三氯乙酸沉淀蛋白质，静置过夜后离心除沉淀。将清液浓缩至200mL，再用透析袋(截留分子量为10Da)流水透析48h，蒸馏水透析24h。将透析袋内溶液减压

7、浓缩后，上DEAE纤维素柱脱色。收集含糖溶液，浓缩冷冻干燥得滇桂艾纳香水溶性粗多糖。将粗多糖用水溶解，以超纯水为洗脱液，上SephadexG10、SephadexG一50凝胶柱反复分离纯化，苯酚一硫酸法显色和紫外光谱检测，用自动部分接收器定量接收洗脱液，合并单峰部分溶液，减压浓缩后冷冻干燥，得BRP．B产物。1．3BRP-B的光谱鉴别参照文献[9]方法，将分离出的BRPB多糖配成质量浓度为2．0×10g／mL