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1、军医进修学院学报1998Sept;19(3)AcadJPLAPostgradMedSch·185·3结核分枝杆菌耐药基因检测吴雪琼 庄玉辉 张俊仙 张晓刚 何秀云 李国利 摘要 目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MT)耐药的分子机制,建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法:通过聚合酶链反应(Polymerasechainreaction,PCR)、PCR2单链构象多态性(Sin2gle2strandedconformationpolymorphism,SSCP)、PCR2限制性片段长度多态性(Restrictionfragmentleng
2、thpoly2morphism,RFLP)分析MT临床分离株的rpoB、rpsL、KatG基因和inhA调节序列。结果:PCR分析耐药基因的敏感性为1～10pgDNA;除rpoB引物PCR扩增为属特异性外,余耐药基因引物PCR扩增都具有较高的种特异性。与传统药敏试验方法相比,PCR和PCR2SSCP检测62株MT分离株利福平(Rifampin,RFP)、链霉素(Strepto2mycin,SM)和异烟肼(Isoniazid,INH)耐药基因型的灵敏度和特异度分别为9318%和9612%(rpoB)、8116%和9117%(rpsL)、7610%和7517%(katG)、16%和100%(i
3、nhA)。20株耐多药分离株,90%2种以上耐药基因突变。通过PCR2RFLP分析MT的rpsL,该基因所有突变均位于43位氨基酸密码子。结论:rpoB、rpsL和katG基因改变分别是MT耐RFP、SM和INH的重要分子机制,通过PCR、PCR2SSCP和PCR2RFLP等分子生物学检测手段可简便、快速地检测大部分MT的耐药基因型。关键词 药物耐受性;聚合酶链反应;单链构象多态现象;多态性,限制性片段长度;分枝杆菌,结核中国图书资料分类法分类号 R521Drug-resistantgenedetectioninclinicallyisolatedMycobacteriumtubercul
4、osisisolatesWuXueqiong,ZhuangYuhui,ZhangJunxian,ZhangXiaogang,HeXiuyun,LiGuoli(TuberculosisResearchLaboratory,309thHospitalofPLA,Beijing100091)AbstractObjective:ToresearchthemolecularmechanismsofdrugresistanceinM.tuberculosis,andtodevelopanewmethodfordetectingthedrugresistance.Methods:TherpoB,rpsL
5、,katGgenesandinhAregulatorysequencein62M.tuberculosisclinicalisolateswereanalysedwithPCR,PCR2SSCPandPCR2RFLP.Results:Thesensitivityofamplifyingthedrug2resistantgeneswithPCRwas1～10pgDNA.Incomparisonwithconventionalsusceptibilitytestingmethods,thesensitivityandspecificityofdetectingthedrug2resistant
6、genesinM.tuberculosisisolateswithPCRandPCR2SSCPwere93.8%and96.2%forrpoB,81.6%and91.7%forrpsL,76.0%and75.7%forkatG,and16%and100%forinhA,respectively.90%ofthemultidrug2resistantstrainshadmutationsinmorethantwodrug2resistantgenes.WehadanalyzedtherpsLgenecodon43instreptomycin2resistantisolates.Itwasfo
7、undthattherpsLgenemutationsallsituatedatcodon43.Conclusion:AlterationsinrpoB,rpsLandkatGgenemaybetheimportantmechanismsofM.tu2berculosisresistancetorifampin,streptomycinandisoniazid.PCR,PCR2SSCPandPCR2RFLParegoin
