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《结核分枝杆菌耐药分子机制及耐药基因检测方法研究进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、338JournalofChinesePhysician,April,2002,Vol4,No4·专家论述·结核分枝杆菌耐药分子机制及耐药基因检测方法研究进展解放军309医院全军结核病中心研究室(北京100091)李国利关键词结核分枝杆菌;耐药基因;检测;综述+[中图分类号]R3781911,R44615[文献标识码]A[文章编号]1008-1372(2002)04-0338-05近年来,在全球范围内,结核分枝杆菌耐药率不断菌分枝菌酸生化合成途上升,高耐药和多耐药菌株不断出现和传播,对化疗疗径中的烯酰基还原酶-效及结核病流行产生很大影响,药物敏感性检测更显NADH复合体结合,抑重要
2、。制其活性,干扰分枝菌在临床实验室,目前分枝杆菌药物敏感性检测仍酸合成,发挥抗菌的作采用常规方法,即绝对浓度法,比例法和抗性比率法。用。结核分枝杆菌耐但这些方法均以细菌生长为终点判断结果,由于结核INH与过氧化氢酶-过分枝杆菌生长缓慢,在得到分离培养物后仍需1～2个氧化物酶编码基因月方能获得结果,急需建立快速、准确、可靠的药物敏KatG和/或烯酰基还原感性试验方法。近年来,随着分子生物学理论和技术酶编码基因inhA突变李国利的发展,结核分枝杆菌的耐药机制及耐药的分子基础有关。KatG基因的突解放军第309医院全军结核大部分已被阐明,建立了快速检测结核分枝杆菌耐药变导致过氧化氢酶-过
3、病中心研究室副主任技师,中国基因的方法,为结核分枝杆菌快速药物敏感性试验开氧化物酶活性降低或丧防痨协会基础(含细菌)专业委辟了一条新的途径。失,阻止INH转换成活员会委员。从事结核病细菌学、1结核分枝杆菌的耐药分子机制性形式,导致耐药。活免疫学、分子生物学研究工作。[1～5]化曾参加军队“八五”攻关课题、国1·1利福平(RFP)RFP是通过特异地与RNAINH形式抑制烯酰家卫生部医学科学基金重点课聚合酶β亚基结合,抑制RNA聚合酶活性,干扰分枝基还原酶活性作用好像题等10余项研究课题,现参加国杆菌RNA的转录及合成,阻碍蛋白质合成而发挥抗菌取决于结合烯酰基还原家973规划“严重传染
4、病防治基作用。近年来的研究发现结核分枝杆菌耐RFP的发酶活性部位的NADH,础研究”项目中子课题研究。曾生是由于其编码RNA聚合酶β亚基的rpoB基因突变编码烯酰基还原酶的获国家级科学技术进步三等奖1所致。rpoB基因含有3534bp的开放阅读框架,编码inhA基因94位密码子项;军队级、国家卫生部和北京1178个氨基酸。rpoB基因少数密码子突变引起它所突变使NADH与之结合市科学技术进步二等奖5项、三编码的氨基酸改变,使RNA聚合酶分子原有RFP结合降低,抑制了INH活化等奖6项。参加专(译)著编写4点的构象发生改变,失去结合RFP的能力,而导致耐形式的结合率,产生耐本,发表论
5、文共50余篇。RFP。药。在结核分枝杆菌耐RFP分离株中,约95%～98%KatG基因位于结核分枝杆菌染色体上,含2223个检出rpoB基因突变,突变一般发生在一个高度保守的核苷酸,在耐INH结核分枝杆菌分离菌株中,约10～81bp(507～533位27个氨基酸密码子)组成的区域内。24%分离株发生KatG完全缺失,过氧化氢酶-过氧化最常见的突变位点是531位丝氨酸(Ser)`亮氨酸物酶阴性,高度耐INH,50%～70%出现点突变部份缺(Leu)置换,526位组氨酸(His)`酪氨酸(Tyr)、天门冬失或插入。是常见的点突变是315位Ser(AGC)-Thr氨酸(Asp)或半胱氨酸
6、(Cys)置换,516位Asp`缬氨酸(ACC)、天冬酰胺(Asn)(AAC)、ILe(ATC)或Arg(CGC)(Val)置换。置换,315位Ser是决定酶活性的关键部位。还可见1·2异烟肼(INH)[5～8]关于INH作用机制,目前的KatG基因104位Arg、108位His、138位Asn、148Leu、研究认为:INH进入菌体后,在分枝杆菌过氧化氢酶-270位His、275位Thr、312位Trp和381位Asp密码子过氧化物酶作用下氧化脱氢生成亲电子形式。这种过突变。inhA基因突变主要见于94位Ser`Ala置换。[5,9,10]氧化氢酶-过氧化物酶活化的INH形式能与
7、分枝杆1·3链霉素(SM)SM是一种在核糖体水平干©1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net中国医师杂志2002年4月第4卷第4期339扰原核生物蛋白质合成的氨基糖苷类抗生素。其主要pncA基因含561个核苷酸,结核分枝杆菌耐PZA作用部位在核糖体30S亚基(由21种核糖体蛋白和分离株pncA突变分布广泛,现已发现20多个位点
