不同基因型戊型肝炎病毒存在多种类型抗原表位.pdf

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1、!"卷#期微生物学报!（"#）：#$%&#$"$%%"年$月!日!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$!’()*+,*-$%%"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!不同基因型戊型肝炎病毒存在多种类型抗原表位##"##$邓蕾，孟继鸿，赵宇，张红梅，戴星（东南大学#基础医学院病原生物学与免疫学系$医学院附属中大医院皮肤科南京$#%%%D）摘要：以戊型肝炎病毒（39K）LM’$重组蛋白N#""OF为免疫原制备单克隆抗体（PJQ)F），采用间接9RSTQ和免疫印迹法，检测PJQ)F与不同基因型和亚型

2、39K重组蛋白N#""0+（*!,型）、N#""U,V（!)型）、N#""P>（*!J型）、N#""P(（8"型）、N#""O（F#型）、N#""W（G猪39K，#型）和N#""X=（?$型）的反应性，采用抗原或抗体竞争9RSTQ分析N#""蛋白与天然39K颗粒之间抗原表位的关系。结果获得!Y.、$9.、##9##、#$32、.Q.和#’#"株稳定分泌PJQ)F的杂交瘤细胞株。!Y.分泌的PJQ)与/种N#""均发生反应，其与免疫原N#""OF的结合可被!、"、#或$型天然39K颗粒或病人血清竞争抑制。$9.、##9##和#$32分泌的PJQ)F只与N#""OF、N#""WG和N#""X

3、=?发生反应，它们与N#""OF的结合仅能被#和SK型病毒或血清所抑制。.Q.分泌的PJQ)只与N#""OF及N#""WG结合，#’#分泌的PJQ)只与N#""OF结合，两者均能被#型美国株竞争抑制，而!、"、$型不能抑制它们与N#""OF的结合。由此可见，不同基因型和亚型39KLM’$编码蛋白N#""上存在多种类型抗原表位，其中包括!、"、#、$基因型共同的，#、$基因型共有的和第#基因型特异的等，这些表位与天然39K颗粒上的抗原表位具有相同的免疫学特征。关键词：戊型肝炎病毒；抗原表位；单克隆抗体；重组蛋白；基因型中图分类号：M.D$文献标识码：Q文章编号：%%%#7"$%D（$%%"

4、）%#7%#$%7%/戊型肝炎（39）是由戊型肝炎病毒（3(N,C;C;F9当以不同基因型和亚型的N#""对39病人和实验K;*+F，39K）引起的一种经消化道传播的急性传染性感染动物血清进行抗体9RSTQ滴定时，发现血清抗［/］肝炎，呈全球分布，以暴发流行或散发感染的形式存体滴度的高低与所用抗原的基因型明显有关，提［#］在。急性39病情较重，病死率为$Z2[，而孕妇示不同基因型39K可能具有不同的抗原表位。因［$］病死率可高达#2[&$%[。39K基因组全长约此，有必要对不同基因型39K抗原表位的差异进行/Z$V)，含有.个开放读码框架（LM’），其中LM’$编深入研究。我们曾通过制备

5、单克隆抗体（PJQ)F）进码病毒的衣壳蛋白。根据全基因组序列分析，39K行抗原表位分析，发现39K第!基因型重组蛋白［.］在全球主要可分为!个基因型：!型来自于亚洲（N#""0+*）和第"基因型重组蛋白（N#""P(8）既含有和非洲，至少包括.个亚型，分别以缅甸株（S,型）、39K共同的抗原表位，又含有基因型特异性的抗原［6，D］巴基斯坦株（S)型）和摩洛哥株（SJ型）为代表；"型表位，提示39K第#、$基因型的重组蛋白中也［!］来自墨西哥；#型来自美国，还包括部分猪39K；可能含有不同于第!、"基因型的抗原表位。为此，$型包括新近发现的39K中国株、台湾株和部分日本文采用代表39K第#

6、基因型的美国株N#""OF为本株。免疫原，制备抗7N#""OF的PJQ)F，进一步分析不同39K是一种MWQ病毒，容易变异，不同39K毒基因型39K重组蛋白N#""的抗原表位特点，并探株在核苷酸和氨基酸水平的同源性高低不一，为诊索基因工程表达的重组蛋白与天然39K颗粒之间断试剂和疫苗的研制带来一定的困难。有研究报抗原表位的关系。［2］道，被39K!型或和"型抗原制备的诊断试剂!材料和方法排除的部分急性非39病人血清对39K$型的多［"］肽呈阳性反应。P(?@等的研究发现，39KLM’$!"!材料基因编码的一段由!2$&"#/位氨基酸组成的重组!"!"!菌株和粪便标本：大肠杆菌（!"#$

7、%&’#$’(#)*’）蛋白（N#""）含有39K构型依赖性中和抗原表位。]P#%D菌株为U*>:(@,公司产品。缅甸株、墨西哥株基金项目：国家自然科学基金（.%$/#$.#，.%$/#$#$）；江苏省自然科学基金（01$%%$%2.）；江苏省卫生厅医学科技发展基金（3$%%##2）；教育部留学回国人员科研启动基金（$%%!#/"）"通讯作者。4(5：6"7$276.$/$!2!；’,8：6"7$276..$!66/；97:,;5：