原位PCR和原位杂交检测蛋鸡J亚群禽白血病病毒.pdf

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1、!!卷"期微生物学报&’()!!0’)"#$$!年%$月!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$*+,’-./#$$!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!原位!"#和原位杂交检测蛋鸡$亚群禽白血病病毒%"%#11徐镔蕊乔素兰董卫星B>+CD)B..BEF;’8G<;AH（%中国农业大学动物医学院北京%$$$3!）（#安徽省农业委员会畜牧局合肥#1$$$%）（1IJ<;AK<@.;@.;AL*A+’(’HCB;-’/;,’/CMNK

2、I9;@,B;A@

3、检组织肿瘤组织、十二指肠、骨髓中出现明显的阳性信号。睾丸、肺、胰腺、大脑、输卵管、肾脏均检出散在的阳性信号。这是国内外首次从分子水平证明蛋鸡O亚群禽白血病。关键词：原位QVR，原位杂交，蛋鸡O亚群禽白血病病毒，+K0I探针中图分类号：X26文献标识码：I文章编号：$$$%87#$3（#$$!）$"8$"6!8$!O亚群禽白血病病毒属V型反转录病毒。自!Y多聚甲醛固定病料，常规石蜡包埋切片，"!:厚［%］%33%年Q;CA.分离出IB&8O原始株PQRN8%$1以的切片贴于涂有多聚赖氨酸防脱片处理的载玻片，［#］来，这种新的I

4、B&8O就一直是肉鸡的重要病原，且!"Z烤%#[备用。同时设两组对照，对照组（%）替代引起肉鸡业的重大损失。它和其它亚群白血病一实验的病料同实验组；阴性样品对照组（#）的组织材样，可以通过水平和垂直传播。它与其它亚群白血料取自NQD鸡，其购自北京市实验动物研究中心。病病毒不同的是O亚群禽白血病病毒侵害的靶细胞%&’引物设计和合成［1］是骨髓细胞。过去针对O亚群禽白血病的研究主根据.A];A^中IB&8O原型株PQRN%$1株［7］要是集中在自然和人工感染的肉鸡上。对于蛋鸡发HS6"编码基因的序列（_!713$），参照N:<

5、,[等的方生该病的自然病例则无相关报道。#$$#年徐镔蕊法，在!"#基因的1T端和HS6"编码基因的内部设计［!］等通过对临床病例研究发现蛋鸡也可自然感染一对引物P"UP（2表%），引物由5;‘;R;公司合成。IB&8O并发生该病，造成严重损失。随后我们对根表%用于()*+$!"#反应的一对引物据组织病理学诊断为O亚群禽白血病的病鸡，又用5;-(.%Q/<:./@>@.La’/QVR’aIB&8O免疫组化和IB&8O的序列分析证实该病。由于蛋鸡0>+(.’,.A+.’a,[.S/<:./*/<.A,;,<’A0

6、;:.B.AH,[U-SQ’@<,<’AU-S自然发生O亚群禽白血病在国内外还是首次报"T8\I5I\5IV5IIIII81TcP"#$"#"6W"#22［"］道，本研究旨在用原位QVR和原位杂交方法检测"T8VIIVVIII\5IIVIVIV81T4P2#$"261W"6$#发病蛋鸡IB&8O核酸，从分子水平证明蛋鸡中存在O亚群禽白血病。%&,探针的制备%&,&%试剂：5REd’(R.;H.A,购自EAJ<,/’H.A；IF&、%材料和方法R0;@

7、%&%组织材料璃奶回收试剂盒购自北京华绿源生物技术公司。地病料取自经组织病理学和免疫组化诊断为O亚高辛标记和检测试剂盒购自R’+[.公司。群禽白血病的病鸡群，这些组织包括肿瘤组织、十二%&,&’总R0I的提取：病料取自46$Z冻存的肿指肠、睾丸、肺、胰腺、大脑、输卵管、骨髓、肾脏。用瘤、骨髓、肝脏和脾脏，%$$:H于离心管中，剪碎，然基金项目：国家自然科学基金资助项目（1$12%$21）作者简介：徐镔蕊（%3""4），女，安徽蚌埠市人，教授，硕士，主要从事动物分子病理学研究，现就职于中国农业大学动物医学院。5.(：678%$

8、87#211$7$；98:;<(：=>-/?@%和原位杂交检测蛋鸡V亚群禽白血病病毒/@/后加入!"#$%&’()%*+,*-.。剧烈震荡!/0后，室温只有与V亚群禽