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1、#1186#GuangdongMedicalJournalJu.l2007,Vo.l28,No.7*免疫磁珠技术在循环肿瘤细胞检测中的应用11v2黄同海综述王正李富荣审校12暨南大学附属第二医院,广东省深圳市人民医院胸外科,临床医学研究中心(518020)免疫磁珠技术(immunomagneticbeads,IMB)是近年来离技术,通过CD45、Ber-EP4抗体对40例大肠癌患者外周国内外研究的一种新的免疫学技术。随着纳米技术的不断血中的肿瘤细胞进行富集,然后应用巢式RT-PCR方法对发展,纳米免疫磁珠具备了良好的磁感
2、应性、超顺磁性、高特富集的肿瘤细胞进行CK20mRNA检测。结果显示该方法可异性、高浓缩性、高分离率、且不影响细胞活性等优点,因此从1ml血中检测出1个癌细胞。包被CD45、Ber-EP4、它能从大量外周血细胞中筛选出带有特异性标记的肿瘤细CD45/Ber-EP4抗体的免疫磁珠检测出CK20mRNA的阳性胞。循环肿瘤细胞(circulatingtumorcells,CTCs)指自发或率分别为8010%,8215%和7215%,在DukesA,B,C,D阳性因诊疗操作进入外周血循环的肿瘤细胞。在外周血中检测率分别为0%,3
3、313%,8617%,9219%。该方法是一种无创、到肿瘤细胞预示着有可能发生肿瘤转移。因此,CTCs的检高灵敏度、高特异性的检测CTCs的方法。测对于临床诊断、监测病情、发现早期存在的微转移等具有2.3免疫磁珠+流式细胞术联合应用免疫磁珠和流式细[1]胞术检测CTCs,是将免疫磁珠的特异性富集分离作用和流重要意义。近年来该技术在检测CTCs的研究中取得了巨大进展,本文对IMB技术的研究现状和应用前景做一综式细胞术的定量计数肿瘤细胞的优点相结合,从而具有更高[5]述。的灵敏度、准确率和可靠性。MORENO等应用包被Ep-
4、CAM抗体的免疫磁珠富集37例转移性前列腺癌患者715ml1IMB技术的基本原理外周血中肿瘤细胞,然后对标本进行多指标流式细胞术分免疫磁珠是均匀、球形具有超顺磁性及保护壳的微粒。析。结果每715ml血中发现前列腺癌细胞的数量变化从0其基本原理是,磁珠既能结合活性蛋白质(抗体),又能被磁~8586个,该方法是一种无创、简便、可靠、快速检测外周血铁所吸引,经过一定处理后,可将特异性单克隆抗体结合在微转移的方法。磁珠上,使之成为抗体的载体。磁珠上抗体与特异性抗原物2.4免疫磁珠+电化学发光法联合应用免疫磁珠和电化质结合后,则形
5、成抗原-抗体-磁珠免疫复合物。把这种复学发光法检测CTCs,克服了ELISA方法检测步骤复杂、费时合物放入磁场中,复合物就会因磁力作用而发生力学移动,以及只能得到半定量结果的缺陷,从而具有更高的敏感性、使复合物与其他物质分离,达到分离特异性成分的目的。此[6]准确性和高效率。YAN等将p53抗体作为分子标志物,种分离技术将抗原抗体反应的高度特异性和磁珠的富集分通过检测p53抗体来检测外周血中肺癌细胞和鼻咽癌细胞。离作用相结合,达到特异性的生物活性物质和细胞的富集和结果,该方法可检测出每毫升标准血清中10pgp53抗体。肺
6、[2]分离效果,使其在临床医学诊断上具有广阔的应用前景。癌和鼻咽癌患者阳性率分别为2816%、813%。该方法与2IMB检测方法ELISA方法相比,具有灵敏度高,检测速度快,特异性高,重2.1免疫磁珠+免疫细胞化学法将免疫磁珠与免疫细胞复性好等优点。化学法相结合用于CTCs的检测,是先将外周血中稀少的肿2.5免疫磁珠+数字显微镜将免疫磁珠与数字显微镜技瘤细胞通过免疫磁珠特异性的富集,其肿瘤细胞的浓度可提术相结合用于CTCs的检测,是将免疫磁珠的特异性高效富34高10~10倍,再进行免疫细胞化学检测和病理学检测,从集分离作
7、用与数字显微镜的自动快速识别肿瘤细胞优点相[3]而具有更高的灵敏度、准确率和可靠性。蔡清清等应用结结合,从而具有更高的敏感性、准确性、效率性。WITZIG[7]合表皮细胞黏附分子(EpCAM)抗体的免疫磁珠富集52例等应用免疫磁珠和数字显微镜技术检测84例乳腺癌患者乳腺癌患者外周血中表达EpCAM抗原的肿瘤细胞,然后通外周血中CK阳性细胞的表达。结果21例乳腺癌患者发现过改良的免疫荧光细胞化学法检测CK8/18阳性的肿瘤细CK阳性细胞,发现CK阳性细胞的中位数为1814个,从而提7出该方法可能成为一种有价值的诊断及评价预
8、后的方法。胞。结果,该方法敏感性较高,可从1@10个外周血单个核[8]细胞中检测出1个癌细胞,特异性达100%。52例乳腺癌患2.6免疫磁珠+荧光原位杂交WUIFING等应用免疫者的外周血中有28例检测到CK阳性细胞,阳性率为磁珠富集分离42例乳腺癌患者外周血CTCs,然后用荧光原5318%。这项实验结果显示出免疫磁
