酪酸梭状芽孢杆菌低成本培养基的优化-论文.pdf

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1、第42卷第1期工业微生物Vo【_42No．12012年02月IndustrialMicrobiologyFleb．2012doi：10。3969[j．issn．1001—6678．2012．01．002酪酸梭状芽孢杆菌低成本培养基的优化戚薇，李安东，尹娅凤，肖瑞峰，宗志友，王海宽(工业微生物教育部重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津300457)摘要：本文重点在于提高酪酸梭状芽孢杆菌活茵数量，降低发酵培养基成本。通过对发酵培养基中不同碳源、氮源、生长因子等进行单因素研究，得到最佳培养基组成：可溶性淀粉10g／L，豆粕(中性蛋白酶水解

2、3h)20g／L，玉米浆3g／L。用此培养基在37℃培养24h，采用高层半固体琼脂试管法对酪酸梭状芽孢杆茵进行活茵计数，活茵数可达8．2x10d．／mL。培养基中添加K2HPO45g／L、MgSO4·7H2O0．2g／L、MnSO4·H2O0．2g／L培养32h时，酪酸梭状芽孢杆菌芽孢转化率可达95％。关键词：酪酸梭状芽孢杆茵；可溶性淀粉；豆粕；培养基优化酪酸梭状芽孢杆菌(Clostridiumbutyricum)，溶性淀粉作为碳源，中性蛋白酶水解豆粕提供其所是一种革兰氏阳性厌氧内生芽孢杆菌n]，又名丁酸需氮源，又使用玉米浆提供其所需生长

3、因子，较大程梭状芽孢杆菌或宫入菌。存在于酸奶、奶酪、人或动度降低了生产成本。对发酵培养基各组分进行优物的粪便、某些土壤中，在部分人群中也能分离到。化，获得有效简易的发酵培养基，为规模化生产提供日本千叶医科大学宫入近治于1933年首先发现并了理论指导。报告，作为微生态制剂来研究，故又名宫入菌。但其1材料及方法药理机制目前还没有比较确切的解释。现在酪酸梭状芽孢杆菌已被大量地研制成饲料添加剂和兽药1．1菌种来源等]。其活菌制剂已应用于消化、外科、小儿、肿瘤酪酸梭状芽孢杆菌(Clostridiumbutyricum)菌等原因造成的肠道菌群失调，急

4、慢性腹泻[3]，抗生素株，天津科技大学酶与应用微生物研究室保藏。相关性肠炎、腹泻或便秘等疾病的治疗]。酪酸梭1．2培养基状芽孢杆菌专性厌氧]，作为微生态制剂可促进肠种子培养基：葡萄糖8g／L，胰蛋白胨10g／L，酵道内有益菌群的生长繁殖【6]，减少胺类物质的产生，母膏4g／L。抑制肠道内有害菌、腐败菌的增值[7]，纠正肠道菌群发酵培养基：葡萄糖8L，胰蛋白胨10g／L，酵失调，减少肠道疾病的产生，起到防病的作用l8]。能母膏4g／L，K2HPO,5L，MgSO4·7H2O0．2g／L，在肠道产生维生素B族、维生素K、蛋白酶、淀粉酶MnSO

5、4·H2O0．2g／L，pH7．2。和氨基酸等若干种酶类和营养物质，这些酶类能促高层半固体琼脂培养基：液体发酵培养基添加进动物对营养物质的吸收和利用，提高动物的生产性能。其代谢物丁酸是肠上皮组织细胞再生、修复0．3％的琼脂。主要的营养物质。对多种抗生素有耐受性，与抗生上述培养基均在121℃灭菌20min。素同用时不会影响其生物作用【9]。酪酸梭状芽孢杆1．3培养方法菌克服了使用抗生素作为饲料添加剂所带来的副作1．3．1种子培养用。作为饲料添加剂时，因其内生芽孢，可避免各种液体试管深层静置培养，37℃厌氧培养16h。物理化学因素影响而失去活

6、性的问题。因此发展前1．3．2发酵培养景可观，社会效益和生态效益显著。本实验使用可5％的接种量加人发酵培养基于100mL平底基金项目：天津市农业科技成果转化与推广项目(0802030)。作者简介：戚薇(1963～)，女(汉)，天津，教授，博导，022—60601958。通讯作者：王海宽(1974～)，男(汉)，内蒙古，副教授，博士。——々——第1期工业微生物第42卷一guR0_【×)＼粗烬烧瓶中，37℃厌氧培养32h。用量为8g／U，匡群n¨等研究得到葡6萄糖的5用量4为1302l1．3．3豆粕等水解液的制备g／t,。陈秋红[1]等研究发

7、现使用玉米淀粉也达到了中性蛋白酶酶活是20万Fig，确保植物蛋白水较理想的效果。可溶性淀粉作为碳源时，降低了生产溶液里含中性蛋白酶20U／mL，酶解温度控制在45成本，故选择可溶性淀粉作为碳源。℃，pH7．5。2．2不同氮源水解时间对活菌数量的影响1．4检测方法考虑到传统有机氮源：牛肉膏、酵母膏、各类蛋1．4．1活茵数量的测定白胨等物质，虽然其含氮量高，微生物较容易吸收利高层半固体琼脂试管计数法[1。。，用移液管取1用，但其价格均较高，不利于规模化生产。本实验采mL菌液加到9mL半固体琼脂试管培养基之中，振用四种廉价氮源：豆粕、花生饼粉、

8、黄豆饼粉、棉籽饼荡搅匀，不能有气泡，依次进行10倍梯度稀释，稀释粉，用中性蛋白酶水解。依据基础培养基，在其他条管和计数管于同一管，每个稀释度作3个平行，37件固定不变的情况下，分别添加20g／