米曲霉发酵制备大豆肽的分离纯化与抗氧化性研究-论文.pdf

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1、2012年3月中国粮油学报Vo1．27，No．3第27卷第3期JournaloftheChineseCerealsandOilsAssociationMat．20l2米曲霉发酵制备大豆肽的分离纯化与抗氧化性研究郁晓敏吴娴静董德坤朱丹华(浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所，杭州31002)摘要利用辐照诱发米曲霉孢子突变，筛选得到酶活力强且特异性高的米曲霉诱变菌株。利用米曲霉诱变菌株对豆腐皮加工后的剩余豆浆(下浆水)进行发酵，制备大豆肽的发酵液，发酵液经超滤和凝胶过滤进行分离纯化，采用铁离子还原抗氧化剂能力测定法(FRAP法)和二苯

2、基苦基苯肼法(DPPH法)研究不同相对分子质量大豆肽的抗氧化能力。结果表明，相对分子质量在l000～10000范围内的大豆肽具有很好的抗氧化活性，其中抗氧化性和稳定性最好的大豆肽组分的相对分子质量在l200～1400之间。关键词大豆肽米曲霉抗氧化性中图分类号：TQ936文献标识码：A文章编号：1003—0174(2012)03—0020—04大豆肽，又称大豆活性肽或大豆功能多肽，是大和二苯基苦基苯肼法(DPPH法)测定大豆肽的抗氧豆蛋白水解产生的具有生理活性的小分子短肽链，化活性，以期增加大豆肽在食品、医药保健品、饲料通常由3～l0

3、个氨基酸组成，相对分子质量在300—添加剂等领域的应用，为大豆低值蛋白的加工利用3000范围内¨J。与大豆蛋白相比，大豆肽无豆腥提供新途径。味，不产生蛋白变性，抗氧化活性显著，易被消化吸收，具有更丰富的营养特性和生理功能I4J。从发展1材料与方法前景看，大豆蛋白水解生产大豆肽是大豆蛋白深加1．1材料工的一个重要方向。菌种：米曲霉Asp3．042(Aspergillusoryzae3．042)。米曲霉(Aspergillusoryzae)是一种需氧真菌，稳原始种由浙江省农业科学院植物保护与微生物研究定性高，易培养，能产生酸性蛋白酶、中

4、性蛋白酶和所提供，经义乌市丹溪酒业有限公司单胞分离的优碱性蛋白酶，其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶，能将大良菌株。分子蛋白质降解成多肽和氨基酸J。大豆加工豆腐原料：下浆水(控制固形物质量分数为15％)，麸皮的过程中产生大量剩余豆浆——下浆水，平均每皮，蔗糖。生产1．5吨的豆腐皮就产生1吨的下浆水。下浆水1．2主要仪器及试剂中的大豆蛋白和低聚糖含量丰富，其含粗蛋白约为LabscaleTFFSystem：美国Millipore公司；AK．5％[61。利用米曲霉可降解下浆水开发高附加值的TATMPrimePlus：GEHeahhcare公司；B

5、acitracin(杆肽类新产品，通过米曲霉在发酵过程中利用原料中菌肽)：上海鼎国。的糖分、纤维等物质作为营养，分泌产生的蛋白酶水1．3菌种的诱变筛选解下浆水中的大豆蛋白，分解产生较小分子质量的米曲霉菌种的诱变筛选参照胡杰等的方法，肽和氨基酸，提高利用价值。蛋白酶活力、氨基酸含量、粗肽含量的测定参照郭继本研究利用叫co辐照诱变对米曲霉菌株进行筛平等的方法。选，将米曲霉诱变菌株A一9应用于大豆肽发酵生1．4大豆肽的制备产；选用豆腐皮加工制作过程中剩余的豆浆(下浆米曲霉分级培养与大豆肽发酵生产参照吴娴静水)为发酵原料；运用超滤技术和凝胶

6、过滤技术分离等的方法，发酵液经6000r／min离心，取上清液制纯化经米曲霉发酵下浆水的发酵液，得到大豆肽溶得大豆肽提取液。液；采用铁离子还原抗氧化剂能力测定法(FRAP法)1．5大豆肽的分离收稿日期：2011—06—24超滤分离：用10000、5000、1000U的超滤膜依作者简介：郁晓敏，男，1979年出生，助研，大豆品质改良通讯作者：朱丹华，男，1957年出生，研究员，大豆遗传育种次分离，收集相对分子质量1000以下、1000～第27卷第3期郁晓敏等米曲霉发酵制备大豆肽的分离纯化与抗氧化性研究215000、5000～10000

7、以及10000以上的发酵液(调19％；其形态学特征与原始菌株相同，连续培养稳定节超滤进出溶液的流速，注意超滤膜进出口的压力性良好。因此，本研究确定米曲霉A一9菌株为最优大小)。发酵菌株，进行下一步的大豆肽发酵生产。凝胶色谱分离：凝胶过滤色谱分离参照周媛媛表2米曲霉诱变菌株的筛选等的方法。1．6抗氧化活性测定FRAP(ferricreducingantioxidantpower)法：铁离子还原抗氧化剂能力(T—AOC)测试盒(南京建成)；DPPH(2，2一diphenyl一1一picrylhydrazy1)法：参照张东杰等_1叫的方法

8、。2结果与讨论2．1菌种诱变筛选在不同辐照强度下米曲霉孢子液的致死率试验中，随着辐照强度的增加，米曲霉孢子的致死率逐渐升高(表1)。当辐照强度达到625Gy时，孢子全部都被辐照灭活；而当辐照强度达500Gy时，孢子致死率为92．5％。