农杆菌介导的大豆萌发种子转化技术-论文.pdf

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1、生物技术通报·研究报告·BloTECHNOLOGYBULLETlN2O13年第8期农杆菌介导的大豆萌发种子转化技术刘志敏熊鹤雯谢皓秦玉涛赵嫣然2郭蓓(1．北京农学院植物科学技术学院，北京102206；2．北京农学院生物科学与工程学院，北京102206)摘要：采用农杆茵介导的萌发种子侵染法，开展大豆遗传转化技术研究。以萌发大豆的生长点、子叶节、下胚轴3处为外植体，将带有抗除草剂草甘膦基因EPSPS及草丁膦抗性筛选基因Bar的质粒借助农杆菌介导转入大豆中，通过共培养及盆栽种植获得转化体。经过对T0代和T。代植株进行双重PCR检测以及两种除草

2、剂的抗性鉴定得到转基因阳性株。试验结果表明，通过农杆菌介导的萌发种子转化法已将抗两种除草剂基因成功的转入大豆中，其综合转化率约为0．37％。关键词：农杆菌萌发种子大豆遗传转化TheTechniqueforAgrobacterium—mediatedTransformationviaGerminatingSeedsofSoybeanLiuZhiminXiongHewenXieHaoQinYutaoZhaoYanranGuoBei‘(1．CollegeofPlantScienceandTechnology，BeijingUniversity

3、ofAgricuhure，Beijing102206；2CollegeofBiologicalScienceandEngtneering，BeijingUniversityofAgriculture，Beijing102206)Abstract：GerminationseedswereusedtoresearchthegenetictransformationtechnologyofAgrobacterium—mediatedinsoybean．Thegrowingpoint，cotyledonnodeandhypocotylofger

4、minationseedwereusedasexplants，andtheplasmidthatcarriedwiththeresistancetotheherbicideglyphosategeneEPSPSandglufosinateresistancescreeninggeneBarwastransferedtosoybeanbyAgrobacterium—mediated．TransformantswereobtainedbyCO—cultureandpottedplantgrowing．AfterthedoublePCRdet

5、ectionaswellasthetwoherbicideresistanceidentificationoftransgenieToandTlplants，thepositivestrainswereacquired．TheexperimentresultsshowedthattwogenesresistancetoherbicideshavebeensuccessfullytransferedtosoybeanviagerminatedseedsbyAgrobacterium-mediatedtransformationmethod

6、，withthetransformationrateofapproximatelyO．37％．Keywords：AgrobacteriumGerminatingseedSoybeanTransformation大豆的遗传转化研究因基因型依赖性强、构建作为外植体进行遗传转化。其中以子叶节法和胚尖再生体系较难等原因，使其转化率较低¨l2J。目前法被广泛地应用，前者获得的植株嵌合体相对较少，大豆遗传转化方法主要有农杆菌介导法、花粉管通但对操作技巧有一定要求，转化率低，后期筛选工道法、子房注射法、基因枪法、真空抽滤法等，其作量较大；后者转化率相

7、对较高，但嵌合体较多；中农杆菌介导法和基因枪法应用较多。自1983年而未成熟胚和下胚轴两种方法由于转化率低未得到Pederson等证明了大豆可作为农杆菌的合适宿主广泛的应用。后，农杆菌介导法得到了广泛应用，但仍存在明显利用大豆生长点转化的方法始于Chee等J，的基因型依赖性。在农杆菌介导法中，可以对大豆称为萌发种子侵染法或微注射法。这种方法是以萌的不同生长时期不同生长部位进行侵染，比如子叶发大豆的生长点、子叶节、下胚轴三处为外植体，节、胚尖、未成熟胚、下胚轴、生长点等部位均可形成伤口后进行农杆菌侵染，然后种植在土壤中进收稿日期：2013

8、-03-05基金项目：国家高技术研究发展计划“863”项目(2012AA101106)作者简介：刘志敏，女，硕士研究生，研究方向：大豆分子育种；E．mail：zhimin2005104@126．COB通讯作