糖基化去除大豆球蛋白免疫原性方法的优化-论文.pdf

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1、动物营养学报2013，25(4)：884-890ChineseJournalofAnimalNutritiondoi：10．3969／j．issn．1006-267x．2013．04．029糖基化去除大豆球蛋白免疫原性方法的优化谭振孙泽威(吉林农业大学动物科学技术学院，长春130118)摘要：为了优化糖基化去除大豆球蛋白免疫原性的方法，本试验采用果寡糖与粗提大豆球蛋白进行干热法糖基化反应，选择不同的温湿度反应条件组合，测定各个反应条件下0—120h产物的蛋白质溶解状况及免疫原性去除效果。结果表明随着时间的推移，各组产物的蛋白质溶解均有下降，而免疫原

2、性去除效果增强，其中在65℃、75％相对湿度、蛋白质与糖摩尔比l：14时反应60h条件下蛋白质溶解及免疫原性去除效果最为理想。该条件可以作为干热法糖基化反应去除大豆球蛋白免疫原性的优化方法。关键词：大豆球蛋白；糖基化；免疫原性；果寡糖中图分类号：$816．9文献标识码：A文章编号：1006-267X(2013)04-0884-07大豆以其优质的营养和功能特性，广泛地应改变大豆致敏结构、掩饰抗原致敏性并增强其功用于食品与饲料行业。但是大豆中的抗原蛋白可能特性的方法已经被认可。Usui等发现采用半引起婴儿、仔猪、犊牛等幼龄动物过敏J，被认乳糖和壳聚糖结

3、合大豆蛋白，可降低大豆蛋白产为是主要的食物过敏原，这在工业发达国家更加生的过敏反应。为此，本研究旨在以果寡糖和大突出。近年来，世界上普遍认为大豆已经成为了豆球蛋白为原料，利用干粉糖基化方法，使抗原蛋“健康杀手”l3J。大豆球蛋白(glycinin)和B一伴白与果寡糖发生有效的糖基化改性，通过观测糖大豆球蛋白(-conglycinin)是致敏性最强的大豆基化前后对抗原蛋白的免疫原性变化和蛋白质溶抗原蛋白，占大豆籽实总蛋白质的65％一80％，因解状况，建立果寡糖与大豆抗原蛋白体外糖基化此也是大豆中主要的抗原蛋白。其中大豆球蛋白工艺，优化糖基化反应条件。

4、大约占大豆中总蛋白质的40％，是一种含糖量(约为0．8％)很少的聚合蛋白质j。随着科学研究的1材料与方法不断深入，热处理、发酵、酶法水解、基因改造、农1．1试验材料艺营养、浸提和糖结合等方法已被用来去除大豆1．1．1大豆球蛋白的分离和粗提的致敏性]。这些方法中以美拉德反应遮掩致敏参照Setsuko等的免疫法，并做部分修改，性为基础的还原糖结合蛋白质形式以其前景广阔对大豆球蛋白进行分离。取100g脱脂大豆粉溶和安全性高的特点逐渐进入人们的视线。以往关于0．03mol／L、pH8．0的2LTris—HC1缓冲液中，于美拉德反应对贝类过敏原J、花生过敏原

5、、樱搅拌lh后于4℃、10000r／rain离心20rain。弃桃过敏原]、B一乳球蛋白]、大豆蛋白_5们等过去沉淀后所得上清液用2moVLHC1调节pH至敏原致敏性影响的研究，得到的结果是有争议的，6．4，4℃、10000r／min离心20min，所得沉淀即所以至今美拉德反应产物对于过敏反应的作用仍为粗l1s部分。将沉淀置于低温通风干燥，不完全清楚。但是，以糖结合蛋白质的形式作为一20℃条件下保存备用。收稿日期：2012—10—26基金项目：国家自然科学基金项目(31072037)作者简介：谭振(1985一)，男，黑龙江佳木斯人，硕士研究生，研究

6、方向为大豆抗营养因子。E-mail：378815526@qq．tom{通讯作者：孙泽威，副教授，硕士生导师，E—mail：sunzewei@jlau．edu．cn4期谭振等：糖基化去除大豆球蛋白免疫原性方法的优化1．1．2大豆球蛋白糖基化样品的制备于蒸馏水中，形成质量体积比为10％的蛋白质溶准确称取4份大豆球蛋白样品，每份20g。液。用稀HC1或稀NaOH调节溶液pH到7，然后分别以摩尔比1：4、l：14、l：30和l：52的比例与果搅拌10min，冷冻干燥制得不同比例的大豆球蛋寡糖(相对分子质量为741．9)混合(表1)，分别溶白一糖混合物，一2

7、O℃保存备用。表1大豆球蛋白与果寡糖的混合比例Table1Ratioofglycinintofructo—oligosaccharide1．2试验方法液配制)，然后在37℃下孵育(湿盒)lh。重复上1．2．1糖基化大豆球蛋白反应次洗板过程，洗板3次(目的是洗去过量的牛血清将不同比例的大豆球蛋白一糖混合物置于底白蛋白)，拍干后加入梯度稀释好的大豆球蛋白标部含有饱和碘化钾水溶液的干燥器中，在特定的准液(取纯化的大豆球蛋白溶液，浓度已测为温度与相对湿度(RH)组合(65℃、65％RH；8．15mg／mE)，用0．03mol／LpH8．0Tris—HCI缓

8、65oC75％RH；75oC、、75％RH)条件下分别进行冲液将蛋白质分别稀释至100、50、10、5、1txg／mL孵育