survivin表达在胃癌诊断中的作用研究

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1、陕西医学杂志2013年12月第42卷第12期15'79Survivin表达在胃癌诊断中的作用研究河北冀中能源峰峰集团总医院普外一科(邯郸056200)王彬谭逸然△摘要目的：检测凋亡抑制基因(Survivin)在胃癌组织中的表达并分析其在胃癌诊断中的意义。方法：采集50例接受手术的胃癌患者癌变组织及临近的将抗组织样本，通过RT—PCR和Westernblot方法检测SurvivinmRNA和蛋白质的表达。使用免疫组织化学方法检测样本中Sur—vivn的表达，TUNEL检测细胞凋亡的状况。结果：RT—PCR显示34(68)例患者的

2、癌变组织呈现Survivin高表达，显著高于正常组织，Westernb

3、ot检测结果与其基本相符。免疫组化检测发现癌变组织的细胞核内Survivin表达附近健康组织中表达显著增强，TUNEL表明在Survivn高表达的癌变组织中细胞凋亡比例显著低于Survivin低表达的健康组织(P一0．02)。结论：癌症组织中Survivin呈现高水平表达，与健康组织有显著的差异Survivin在胃癌诊断中具有潜在的应用价值。主题词胃肿瘤／诊断@Survivin【中图分类号】R735．2【文献标识码】A【文章编号11000-7377(201

4、3)12—1579—02凋亡抑制基因(Survivin)凋亡抑制蛋白(IAP)家参及各样本循环参数：内参Betaactin95℃5s，60℃族的新成员，Survivin蛋白包含了一个由7O个氨基酸20s，72℃20s；TLR4：95℃5s，60℃20s，72℃20s。组成的结构域，在进化上极其保守口]。因为Survivin3Westernblot取冷冻保存的组织，提取蛋在正常组织中的表达水平极低，因此Survivn正逐渐白，定量并进行SDS-PAGE电泳，120伏电泳90min，成为癌症诊断和预后评价的重要分子标志，并且具有然

5、后200mA2h电转印于PVDF膜上。用封闭液(1成为抗癌靶点的潜力L2]。本研究通过分子生物学和×TBST，5脱脂奶粉)室温振摇封闭2h，洗膜。加免疫组织化学方法检测Survivn在胃癌患者癌变组织入兔抗人Survivin一抗(1：200)，室温孵育2h，洗及正常组织中的表达，并探讨其在胃癌诊断中的应用。膜，加入HRP标记的羊抗兔IgG(1：2000)室温孵育材料与方法1．5h，洗膜。最后用ECL化学发光试剂盒检测杂交1材料以2009年4月至2012年4月期间信号，在Bio—Rad凝胶仪上成像。前来我院接受手术治疗的50例早

6、期胃癌患者为研究4免疫组织化学将制备好的切片放人60℃恒对象。其中33例男性，17例女性，平均年龄为62．2温烘箱中烤2h使组织紧密贴片；切片常规脱蜡至水；岁。在手术期间分别采集病人的肿瘤组织及其邻近的30H2O。1份+去离子水1O份混合，室温5～10rain正常黏膜组织。一部分组织经液氮冷冻后于一8O℃保以灭火内源性酶，去离子水洗3次；滴加5BSA封闭存备用。剩余样品经10甲醛固定后包埋并制备石液，室温20min，甩去多余液体，不洗；滴加1：100稀蜡切片。根据Lauren法对肿瘤进行分类评估并使用释的一抗，4℃过夜；将玻片

7、从4℃冰箱中取出，37℃复uicc／AJCCTNM方法进行分期。其中33例患者出温1h，用免疫组化专用PBS洗3次，每次2rain；滴加现淋巴结转移，其余17例无淋巴结转移，29例患者为生物素化山羊抗兔IgG，37℃20min；免疫组化专用肠内型，21例为扩散型。PBS洗3次，每次2min；滴加试剂SABC，37℃2RT—PCR采用Trizol法提取样本中的20min；PBS洗4次，每次5min；DAB显色：使用DABRNA。操作步骤严格按照说明书进行。采用简并引显色试剂盒。取lml去离子水，加试剂盒中A，B，C物和BBI公司

8、AMVFirstStrandcDNASynthesis试剂各1滴，混匀后加至切片。室温显色，镜下控制反Kit，以总RNA为模板逆转录合成第一链。严格按照应时问，约5～6rain，去离子水洗涤；苏木素复染1～说明书操作，获得cDNA文库，用于荧光定量PCR分2rain，自来水返蓝25min；常规脱水透明，中性树胶封析。荧光定量PCR反应条件为：95℃变性30s后，内固；Olympus普通光学显微镜下观察回肠组织形态结构，通过自动成像系统采图拍照。通过一个评分系统△广州医科大学基础学院生物技术系2009级来反映Survivin的表

9、达水平：染色阳性细胞比例低于158O陕西医学杂志2013年12月第42卷第12期5为0分，5～25为1分，25～5O为2分，组织中出现survivin的高表达，但是在部分正常组织5O％～75为3分，大于75为4分，评分低于1分中也发现Survivin的表达]。也有研究发现Su