RNAi沉默polβ基因部分逆转食管鳞癌细胞顺铂耐药性.pdf

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1、第二军医大学学报２０１４年３月第３５卷第３期ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｊｓｍｍｕ．ｃｎ·２７９·ＡｃａｄｅｍｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍａｒ．２０１４，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．３ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１００８．２０１４．００２７９·论著·ＲＮＡｉ沉默ｐｏｌβ基因部分逆转食管鳞癌细胞顺铂耐药性１２１１唐悦，王黎，柳璐璐，李敏１．郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室，郑州４５００５２２．郑州大学基础医学院寄生虫学教研室，郑州４５００５２［摘要］目的通过ＲＮＡ干扰（ＲＮＡｉ

2、）技术沉默ＤＮＡ聚合酶ｐｏｌβ的表达，观察其对食管癌细胞顺铂（ｃＤＤＰ）耐药性的影响。方法构建靶向ｐｏｌβ基因的ｓｉＲＮＡ重组慢病毒ｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ１、ｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ２及阴性对照载体ｐＲＮＡＴＵ６．２／ＬｅｎｔｉｐｏｌβＣ，将其感染人食管鳞癌顺铂耐药细胞系ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ，通过ＲＴＰＣＲ、蛋白质印迹分析和免疫荧光实验观察细胞ｐｏｌβ的表达情况，采用ＭＴＴ法观察不同浓度顺铂对细胞生长的抑制作用并计算５０％细胞生长抑制所需的药物浓度（ＩＣ５０）和耐药指数（ＲＩ）。结果靶向ｐｏｌ

3、β的ｓｉＲＮＡ重组慢病毒ｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ１和ｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ２感染ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ后均可下调ｐｏｌβ的ｍＲＮＡ和蛋白表达水平，其中前者效果更为显著。顺铂以剂量依赖方式抑制ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ细胞增殖，感染ｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ１、ｐＲＮＡＴＵ６．２／ＬｅｎｔｉｐｏｌβＣ的ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ细胞及未感染ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ细胞对顺铂的ＩＣ５０分别为５５．７１、６２．４１、６３．１１μｇ／ｍＬ，耐药指数分别为１３．９、１５．５、１５．７，其中前者与后二者

4、相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论ｐｏｌβ的表达与食管鳞癌细胞系ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ顺铂耐药性有关，沉默其表达可部分逆转ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ细胞对顺铂的耐药性。［关键词］食管肿瘤；肿瘤抗药性；顺铂；ｐｏｌβ；ＲＮＡ干扰［中图分类号］Ｒ７３５．１［文献标志码］Ａ［文章编号］０２５８８７９Ｘ（２０１４）０３０２７９０６ＲＮＡｉｓｉｌｅｎｃｉｎｇｏｆｐｏｌβｇｅｎｅｐａｒｔｌｙｒｅｖｅｒｓｉｎｇｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎ１，ＷＡＮＧＬｉ２，ＬＩＵＬｕｌｕ

5、１，ＬＩＭｉｎ１ＴＡＮＧＹｕｅ１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００５２，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００５２，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｉｌｅｎｃｅｐｏｌβｇｅｎ

6、ｅｂｙＲＮＡｉｔｅｃｈｎｉｑｕｅａｎｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｉｔｓｅｆｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎ（ｃＤＤＰ）．ＭｅｔｈｏｄｓＷｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｉＲＮＡｔａｒｇｅｔｉｎｇｐｏｌβｇｅｎｅｓ．ＴｈｅｔｗｏｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｉＲＮＡｔａｒｇｅｔｉｎｇｔｈｅｐｏｌβｇｅｎｅｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎａｔｅｄａｓｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ

7、１ａｎｄｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ２，ａｎｄｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｖｅｃｔｏｒａｓｐＲＮＡＴＵ６．２／ＬｅｎｔｉｐｏｌβＣ；ｔｈｅｙｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｉｎｆｅｃｔＥＣ９７０６／ｃＤＤＰｃｅｌｌｓ，ｗｈｉｃｈｗａｓｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｃＤＤＰ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｏｌβｗａｓｔｈｅｎｅｘａｍｉｎｅｄｂｙＲＴＰＣＲ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇａｎｄｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．ＭＴＴｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｃＤＤＰ；ｔｈｅＩＣ５０

8、ｏｆｃＤＤＰａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘ（ＲＩ）ｗｅｒｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＢｏｔｈｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ１ａｎｄｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉ